阿霉素致大鼠慢性心力衰竭后c-kit與nanog基因表達變化.pdf

1、背景:c-kit和nanog在干細胞的生長、增殖和分化中具有重要作用，探明c-kit與nanog陽性細胞和疾病之間的關系近年來引起關注。心臟中的c-kit+和nanog+細胞為心肌干細胞，它們能夠分化成心肌細胞。我們以往的研究表明，在心肌梗死的邊緣區(qū)nanog的表達增加，有利于修復受損心肌。然而心臟干細胞在心衰心臟中是增加還是減少，心衰是加強還是減弱心肌再能力仍不明確。
　　目的:探討阿霉素致大鼠心力衰竭后心肌組織中c-kit與n

2、anog的基因表達變化，為進一步研究充血性心衰過程中心肌再生提供形態(tài)學基礎。
　　方法:
　　1140只SD成年雄性大鼠，隨機分為正常對照組15只與心衰模型組125只。心衰模型的制造:阿霉素按4mg/kg腹腔注射，每周一次，共6周。正常對照組給予等量生理鹽水。在8周時，利用小動物彩超機對正常對照組和心衰模型組大鼠進行心功能檢測，證明心衰形成;
　　2摘取大鼠心臟，取右心壁近房室環(huán)處組織制作冰凍切片;利用免疫組化、免疫熒

3、光顯色等技術檢測心肌組織中nanog和c-kit的基因表達部位;
　　3提取右心壁近房室環(huán)處組織蛋白和mRNA;利用Western Blotting和RT-PCR等技術檢測和定量心肌組織中nanog和c-kit的基因表達量的變化。
　　結果:
　　1免疫組化顯示正常和心衰的心肌組織中均有少量nanog與c-kit陽性細胞表達。正常心肌組織中nanog細胞較少，小而圓，可散在，也可成群存在，位于心肌細胞之間、血管周圍。大

4、多數血管的內皮細胞均表達nanog，少量心肌細胞也呈陽性表達。心力衰竭大鼠的心肌組織內，nanog陽性的三類細胞均減少，而且只有在心內膜和心外膜下的心肌組織呈陽性分布。在正常和心力衰竭大鼠心肌組織中c-kit陽性細胞呈小圓形或橢圓形，三五成群存在，但未見到心肌細胞和內皮細胞c-kit陽性表達。與正常心肌相比，心力衰竭心肌內c-kit陽性細胞明顯減少。
　　2免疫熒光顯示在正常對照組中nanog蛋白表達于更多的心肌中，主要在部分心肌

5、細胞表達、血管內皮和小圓形細胞也呈強陽性表達，分布不均勻。心力衰竭心肌中nanog表達陽性的細胞主要分布于心外膜下心肌和心內膜下心肌，表達量較正常心肌明顯減少，且心內膜側心肌表達量較心外膜側減少。c-kit蛋白主要表達于心肌中的小型細胞，這些細胞在心肌中往往成群分布，主要聚集于心外膜下的心肌內。與正常心肌相比，心衰后c-kit陽性細胞明顯減少。未見到心肌細胞和內皮細胞表達c-kit熒光。另外，還可以觀察到少數細胞共表達nanog和c-k

6、it現(xiàn)象。
　　3 Western blotting結果顯示:正常對照組中c-kit與nanog的表達量分別為451846.3±7029.35和301859.0±3549.73;心衰模型組中c-kit和nanog表達量分別為146428.7±8029.24和196803.3±3066.76;正常對照組c-kit蛋白和nanog蛋白表達明顯多于心衰模型組(P＜0.05)。
　　4 RT-PCR結果顯示:在正常對照組中c-kit