兔支氣管敗血波氏桿菌的分離鑒定及某些生物學(xué)特性研究.pdf

1、支氣管敗血波氏桿菌(Bordetella bronchiseptica，Bb)是引起多種哺乳動物呼吸道隱性感染及急、慢性炎癥的病原菌，病兔臨床上以發(fā)生鼻炎，出現(xiàn)打噴嚏和呼吸困難，從鼻腔流出漿液、粘液性分泌物為特征。支氣管敗血波氏桿菌與百日咳波氏桿菌(B.pertussis)、副百日咳波氏桿菌(B.parapertussis)列為一群，將包括禽波氏桿菌(B.avium)在內(nèi)的其余四種歸為另一群，列于革蘭氏陰性好氧桿菌和球菌，博德特氏菌屬(

2、Bordetella Moreno-Lopez,1952)。近年來，隨著我國規(guī)模化養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展，支氣管敗血波氏桿菌感染明顯增加，并常與多殺性巴氏桿菌、葡萄球菌等混合感染，已成為兔業(yè)養(yǎng)殖中發(fā)病率和死亡率增加的重要原因之一，給養(yǎng)兔業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究從Bb的分離和鑒定、病例的復(fù)制、菌相免疫學(xué)和粘附特性四個方面進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，結(jié)果如下： 1、兔支氣管敗血波氏桿菌的分離與鑒定：2005年10月～2006年12月間，通過對江蘇南

3、京地區(qū)4家實(shí)驗(yàn)兔場和山東淄博1家商品兔場有鼻炎癥狀的患兔鼻腔分泌物進(jìn)行兔支氣管敗血波氏桿菌的分離鑒定，了解支氣管敗血波氏桿菌在兔群中的感染情況，并對該菌的某些生物學(xué)特性進(jìn)行研究。共采集有明顯鼻炎癥狀的194份患兔鼻腔分泌物，分離出56株支氣管敗血波氏桿菌，分離率為17.87％～39.39％，平均分離率28.86％，結(jié)果顯示支氣管敗血波氏桿菌是引起家兔鼻炎的重要病原菌，分離率較高，該病的發(fā)生與季節(jié)具有一定的相關(guān)性，分離菌具有特定的生長特性

4、、形態(tài)特性、生化反應(yīng)特性和對抗生素的敏感特性。 2、支氣管敗血波氏桿菌人工感染動物模型的建立：對鑒定后的19株支氣管敗血波氏桿菌進(jìn)行了ICR小鼠毒性比較研究，并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行了分離菌對兔致病性差異研究；用BJL9504菌株(Ⅰ相菌)以不同攻毒途徑對30～40日齡兔進(jìn)行致病作用比較研究；用凍干保存的3株強(qiáng)毒力菌株以靜脈注射途徑攻毒家兔，根據(jù)致病性篩選毒力穩(wěn)定的菌株作為疫苗候選株。ICR小鼠毒性試驗(yàn)表明，19株分離菌中11株為超強(qiáng)毒

5、，3株為強(qiáng)毒，3株低毒，2株弱毒，分離菌中BJlD504對小鼠和兔均為高致病性，但BALM0503對小鼠為低致病性，對兔為高致病性，其他分離菌對小鼠和兔的致病性也不完全相同；通過肺內(nèi)和靜脈注射感染的兔死亡率較高，發(fā)病癥狀和剖檢癥狀也比滴鼻感染明顯；凍干保存15個月后BJL0504分離菌對兔依然有較高致病性，其他兩株凍干菌致病性也沒有變化，BJL0504分離菌可以作為疫苗候選株。 3、支氣管敗血波氏桿菌不同相小鼠免疫保護(hù)試驗(yàn)：為了

6、研究不同相的支氣管敗血波氏桿菌的免疫保護(hù)情況，首先對分離菌的培養(yǎng)特性與相變特點(diǎn)以及不同相的致病性進(jìn)行了研究，接著對該菌Ⅰ相菌和Ⅲ相菌進(jìn)行滅活并免疫ICR小鼠，觀察免疫產(chǎn)生期和攻毒保護(hù)效果。試驗(yàn)表明，Bb-F<,1>～F<,6>代菌動力試驗(yàn)陽性，F(xiàn)<.7>～F<,12>代菌則為陰性，其余生化試驗(yàn)結(jié)果F<,1>～F<,12>代菌完全相同；根據(jù)細(xì)菌溶血情況確定F<,1>和F<,9>分別為Ⅰ相菌和Ⅲ相菌。小鼠攻毒保護(hù)試驗(yàn)表明，經(jīng)Bb-Ⅰ相菌和Ⅲ

7、相菌滅活苗免疫小鼠后，均能產(chǎn)生完全攻毒保護(hù)作用。 4、支氣管敗血波氏桿菌粘附特性研究：用HEP-2細(xì)胞(人喉上皮細(xì)胞癌細(xì)胞系)作為體外模型，比較研究了支氣管敗血波氏桿菌Ⅰ相菌和Ⅲ相菌的體外粘附特性和粘附動力學(xué)。結(jié)果表明，強(qiáng)毒力分離菌BJL0504菌株Ⅰ相菌在體外可以粘附HEP-2細(xì)胞，而其傳代Ⅲ相菌在體外不能粘附該細(xì)胞，與該菌Ⅰ相菌和Ⅲ相菌的致病性具有相關(guān)性。粘附動力學(xué)試驗(yàn)顯示隨著作用時(shí)間的延長，Bb-Ⅰ相菌在體外粘附HEP-2