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文檔簡介
1、目的:
1.研究CD155分子在結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)情況,通過基因轉(zhuǎn)染使結(jié)腸癌細(xì)胞CD155分子表達(dá)上調(diào),明確NK細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞的作用與其表達(dá)強(qiáng)弱的關(guān)系。
2.檢測結(jié)腸癌細(xì)胞和較大樣本結(jié)腸癌組織中CD112分子的表達(dá)情況,分析其與臨床病例組織病理指標(biāo)(分化程度,Duke’s分期)的關(guān)系。
方法:
1.用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞系Colo205、SW480及SW620
2、,0.25%胰酶消化傳代,取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行FCM和Western blot檢測,分析CD155和CD112在結(jié)腸癌細(xì)胞上的表達(dá)情況。
2.應(yīng)用組織芯片,采用免疫組織化學(xué)SP染色法檢測較大樣本結(jié)腸癌組織中CD112的表達(dá)情況,并分析其與臨床病例組織病理分級的關(guān)系。
3.采用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),將CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染SW620細(xì)胞系使其表達(dá)上調(diào),同時(shí)將CD155-SiRNA干擾SW620細(xì)胞系使其表達(dá)下調(diào),F(xiàn)C
3、M和Western blot檢測。
4.用含20%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)NK92-mi細(xì)胞系。將NK92-mi細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞,CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染SW620的細(xì)胞及CD155-SiRNA干擾的SW620細(xì)胞系作為靶細(xì)胞,按照效應(yīng)細(xì)胞比靶細(xì)胞為5:1調(diào)整好細(xì)胞濃度后,采用CFSE法檢測NK細(xì)胞對兩處理組及正常對照組細(xì)胞的殺傷水平是否存在差異。
結(jié)果:
1.FCM:CD155在Colo205
4、、SW480和SW620三種結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)分別為:87.2%、97.7%及42.7%;CD112在Colo205、SW480和SW620三種結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)分別為:97.4%、98.7%及88.8%。Western blot顯示在Colo205、SW480和SW620細(xì)胞系中CD112(Mr為64kd)和CD155(Mr為70kd)分子蛋白條帶均有明顯表達(dá)。
2.免疫組化:檢測結(jié)腸癌組織芯片(90例),由于芯片自身及實(shí)驗(yàn)
5、操作中的原因,5例發(fā)生脫片,最終有效觀察85例,其中CD112陽性表達(dá)36例,陽性率(42.35%);對照組的有效觀察例數(shù)為30例,弱陽性表達(dá)3例,陽性率(10%)。兩組之間CD112表達(dá)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3.FCM測得:CD155分子在SW620細(xì)胞(CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的SW620細(xì)胞,CD155-SiRNA干擾的SW620細(xì)胞及未經(jīng)處理的SW620細(xì)胞)上的表達(dá)率分別為:87.2%,7.2%和42.7%。Wes
6、tern blot結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染CD155質(zhì)粒DNA的SW620細(xì)胞CD155表達(dá)增強(qiáng),CD155-SiRNA干擾的SW620細(xì)胞CD155表達(dá)減弱。
4.CFSE法測得NK92-mi細(xì)胞對CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的SW620細(xì)胞、CD155-SiRNA干擾的SW620細(xì)胞及未經(jīng)處理的結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的殺傷率分別為:70.6%、17.1%、41.6%。
結(jié)論:
1.CD155分子及CD112分子在結(jié)腸癌
7、細(xì)胞系(Colo205、SW480及SW620)上均有表達(dá),且colo205及SW480細(xì)胞表達(dá)率較高。
2.結(jié)腸癌組織芯片檢測較大樣本(85例)結(jié)腸癌組織中CD112的表達(dá)情況與臨床病例組織病理指標(biāo)(分化程度,Duke’s分期)之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異及相關(guān)性。
3.通過CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染SW620細(xì)胞可使CD155分子表達(dá)上調(diào),同時(shí)CD155-SiRNA干擾SW620細(xì)胞可使CD155分子表達(dá)下調(diào)。
4.
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