基因修飾結(jié)腸癌細(xì)胞與NK細(xì)胞殺傷敏感性的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　1.研究CD155分子在結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)情況，通過(guò)基因轉(zhuǎn)染使結(jié)腸癌細(xì)胞CD155分子表達(dá)上調(diào)，明確NK細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞的作用與其表達(dá)強(qiáng)弱的關(guān)系。
　　2.檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞和較大樣本結(jié)腸癌組織中CD112分子的表達(dá)情況，分析其與臨床病例組織病理指標(biāo)（分化程度，Duke’s分期）的關(guān)系。
　　方法：
　　1.用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞系Colo205、SW480及SW620

2、，0.25％胰酶消化傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行FCM和Western blot檢測(cè)，分析CD155和CD112在結(jié)腸癌細(xì)胞上的表達(dá)情況。
　　2.應(yīng)用組織芯片，采用免疫組織化學(xué)SP染色法檢測(cè)較大樣本結(jié)腸癌組織中CD112的表達(dá)情況，并分析其與臨床病例組織病理分級(jí)的關(guān)系。
　　3.采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染SW620細(xì)胞系使其表達(dá)上調(diào)，同時(shí)將CD155-SiRNA干擾SW620細(xì)胞系使其表達(dá)下調(diào)，F(xiàn)C

3、M和Western blot檢測(cè)。
　　4.用含20％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)NK92-mi細(xì)胞系。將NK92-mi細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染SW620的細(xì)胞及CD155-SiRNA干擾的SW620細(xì)胞系作為靶細(xì)胞，按照效應(yīng)細(xì)胞比靶細(xì)胞為5：1調(diào)整好細(xì)胞濃度后，采用CFSE法檢測(cè)NK細(xì)胞對(duì)兩處理組及正常對(duì)照組細(xì)胞的殺傷水平是否存在差異。
　　結(jié)果：
　　1.FCM：CD155在Colo205

4、、SW480和SW620三種結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)分別為：87.2％、97.7％及42.7％；CD112在Colo205、SW480和SW620三種結(jié)腸癌細(xì)胞系的表達(dá)分別為：97.4％、98.7％及88.8％。Western blot顯示在Colo205、SW480和SW620細(xì)胞系中CD112（Mr為64kd）和CD155（Mr為70kd）分子蛋白條帶均有明顯表達(dá)。
　　2.免疫組化：檢測(cè)結(jié)腸癌組織芯片（90例），由于芯片自身及實(shí)驗(yàn)

5、操作中的原因，5例發(fā)生脫片，最終有效觀察85例，其中CD112陽(yáng)性表達(dá)36例，陽(yáng)性率（42.35％）；對(duì)照組的有效觀察例數(shù)為30例，弱陽(yáng)性表達(dá)3例，陽(yáng)性率（10％）。兩組之間CD112表達(dá)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.FCM測(cè)得：CD155分子在SW620細(xì)胞（CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的SW620細(xì)胞，CD155-SiRNA干擾的SW620細(xì)胞及未經(jīng)處理的SW620細(xì)胞）上的表達(dá)率分別為：87.2％，7.2％和42.7％。Wes

6、tern blot結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染CD155質(zhì)粒DNA的SW620細(xì)胞CD155表達(dá)增強(qiáng)，CD155-SiRNA干擾的SW620細(xì)胞CD155表達(dá)減弱。
　　4.CFSE法測(cè)得NK92-mi細(xì)胞對(duì)CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的SW620細(xì)胞、CD155-SiRNA干擾的SW620細(xì)胞及未經(jīng)處理的結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的殺傷率分別為：70.6％、17.1％、41.6％。
　　結(jié)論：
　　1.CD155分子及CD112分子在結(jié)腸癌

7、細(xì)胞系（Colo205、SW480及SW620）上均有表達(dá)，且colo205及SW480細(xì)胞表達(dá)率較高。
　　2.結(jié)腸癌組織芯片檢測(cè)較大樣本（85例）結(jié)腸癌組織中CD112的表達(dá)情況與臨床病例組織病理指標(biāo)（分化程度，Duke’s分期）之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異及相關(guān)性。
　　3.通過(guò)CD155質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染SW620細(xì)胞可使CD155分子表達(dá)上調(diào)，同時(shí)CD155-SiRNA干擾SW620細(xì)胞可使CD155分子表達(dá)下調(diào)。
　　4.