騷擾阿蚊唾液腺蛋白對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景和目的：
　　蚊蟲(chóng)（Culicidae）是蟲(chóng)媒?。ˋrbo-disease）的重要媒介，全球已知蚊種有3500余種，蚊蟲(chóng)傳播疾病具有蚊種特異性，不同的蚊種傳播的疾病不同，同一蚊種也可以傳播多種疾病，同種疾病也可由幾種蚊種為傳播媒介，如：按蚊可以傳播人類(lèi)瘧疾（如岡比亞按蚊Anopheles gambiae），埃及伊蚊（Aedes aegypti）和白紋伊蚊（Aedes albopictus）傳播黃熱病和登革熱等。
　　騷擾

2、阿蚊（Armigeres subalbatus）是與人類(lèi)居住環(huán)境關(guān)系密切的蚊蟲(chóng)，目前已知，它可以傳播淋巴絲蟲(chóng)病，犬惡絲蟲(chóng)病，日本腦炎，西尼羅熱等疾病。廣東省地處亞熱帶，一直是蚊媒病的重要流行區(qū)，溫暖、潮濕的氣候?yàn)槲米拥纳嫣峁┝肆己玫沫h(huán)境，蚊蟲(chóng)越冬時(shí)間短，甚至無(wú)需越冬，蚊媒性疾病流行和威脅依然不能忽視。
　　吸血昆蟲(chóng)的唾液腺蛋白在傳播蟲(chóng)媒病的過(guò)程中發(fā)揮重要作用，是目前醫(yī)學(xué)研究中的一項(xiàng)重要課題。本研究從免疫細(xì)胞的角度，觀察唾液腺蛋白

3、對(duì)宿主免疫系統(tǒng)的影響，分別從唾液腺蛋白對(duì)宿主免疫細(xì)胞的負(fù)向調(diào)節(jié)作用，唾液腺蛋白對(duì)宿主免疫細(xì)胞凋亡的影響，探究騷擾阿蚊傳播疾病的機(jī)制。
　　方法：
　　1.野外采集騷擾阿蚊的四齡幼蟲(chóng)和蛹，在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)至成蚊。
　　2.分別用不同濃度的騷擾阿蚊雌、雄成蚊唾液腺蛋白連同干擾素刺激小鼠腹腔液細(xì)胞,用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞因子CXCL10，STAT1，iNOS, IFN-β, TNF-α的表達(dá)情況，用Griess Test檢測(cè)一氧

4、化氮（NO）的產(chǎn)生情況。
　　3.用雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白刺激小鼠的腹腔液細(xì)胞、脾淋巴細(xì)胞，人的外周血單核細(xì)胞（PBMC），RAW264.7，THP-1,用 Annexin-V檢測(cè)騷擾阿蚊唾液腺蛋白對(duì)免疫細(xì)胞凋亡情況的影響，
　　4.分別用熒光顯微鏡檢測(cè)caspase-3的表達(dá)情況，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Fas，caspase-8, p38 MAPK，JNK在唾液腺蛋白誘導(dǎo)的免疫細(xì)胞凋亡中的作用。
　　結(jié)果：
　　1：

5、經(jīng)雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白預(yù)處理的小鼠腹腔液細(xì)胞中CXCL10，STAT1，iNOS, IFN-β，TNF-α的表達(dá)較單獨(dú)IFN-γ處理組顯著下降；雄性唾液腺蛋白預(yù)處理的與陰性對(duì)照組沒(méi)有區(qū)別。
　　2：雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白可以誘導(dǎo)小鼠腹腔液細(xì)胞，小鼠的脾淋巴細(xì)胞，人的外周血單核細(xì)胞（PBMC），細(xì)胞株RAW264.7，THP-1發(fā)生凋亡；雄性騷擾阿蚊唾液腺蛋白未誘導(dǎo)宿主免疫細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　3：雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白誘導(dǎo)F

6、as受體表達(dá)上調(diào)，但未激活caspase-8，p38抑制劑可以抑制騷擾阿蚊唾液腺蛋白誘導(dǎo)的小鼠腹腔液細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論：
　　1：雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡，但沒(méi)有嚴(yán)格的宿主和免疫細(xì)胞的特異性。
　　2：騷擾阿蚊傳播疾病的機(jī)制，在一定程度上依賴(lài)于雌蚊唾液腺蛋白誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡，干擾宿主的免疫反應(yīng)。
　　3:Fas受體，caspase-3, caspase-8,p38 MAPK參與雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋