騷擾阿蚊唾液腺蛋白對免疫細胞的調節(jié)作用.pdf

1、背景和目的：
　　蚊蟲（Culicidae）是蟲媒病（Arbo-disease）的重要媒介，全球已知蚊種有3500余種，蚊蟲傳播疾病具有蚊種特異性，不同的蚊種傳播的疾病不同，同一蚊種也可以傳播多種疾病，同種疾病也可由幾種蚊種為傳播媒介，如：按蚊可以傳播人類瘧疾（如岡比亞按蚊Anopheles gambiae），埃及伊蚊（Aedes aegypti）和白紋伊蚊（Aedes albopictus）傳播黃熱病和登革熱等。
　　騷擾

2、阿蚊（Armigeres subalbatus）是與人類居住環(huán)境關系密切的蚊蟲，目前已知，它可以傳播淋巴絲蟲病，犬惡絲蟲病，日本腦炎，西尼羅熱等疾病。廣東省地處亞熱帶，一直是蚊媒病的重要流行區(qū)，溫暖、潮濕的氣候為蚊子的生存提供了良好的環(huán)境，蚊蟲越冬時間短，甚至無需越冬，蚊媒性疾病流行和威脅依然不能忽視。
　　吸血昆蟲的唾液腺蛋白在傳播蟲媒病的過程中發(fā)揮重要作用，是目前醫(yī)學研究中的一項重要課題。本研究從免疫細胞的角度，觀察唾液腺蛋白

3、對宿主免疫系統(tǒng)的影響，分別從唾液腺蛋白對宿主免疫細胞的負向調節(jié)作用，唾液腺蛋白對宿主免疫細胞凋亡的影響，探究騷擾阿蚊傳播疾病的機制。
　　方法：
　　1.野外采集騷擾阿蚊的四齡幼蟲和蛹，在實驗室飼養(yǎng)至成蚊。
　　2.分別用不同濃度的騷擾阿蚊雌、雄成蚊唾液腺蛋白連同干擾素刺激小鼠腹腔液細胞,用RT-PCR檢測細胞因子CXCL10，STAT1，iNOS, IFN-β, TNF-α的表達情況，用Griess Test檢測一氧

4、化氮（NO）的產(chǎn)生情況。
　　3.用雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白刺激小鼠的腹腔液細胞、脾淋巴細胞，人的外周血單核細胞（PBMC），RAW264.7，THP-1,用 Annexin-V檢測騷擾阿蚊唾液腺蛋白對免疫細胞凋亡情況的影響，
　　4.分別用熒光顯微鏡檢測caspase-3的表達情況，用流式細胞儀檢測Fas，caspase-8, p38 MAPK，JNK在唾液腺蛋白誘導的免疫細胞凋亡中的作用。
　　結果：
　　1：

5、經(jīng)雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白預處理的小鼠腹腔液細胞中CXCL10，STAT1，iNOS, IFN-β，TNF-α的表達較單獨IFN-γ處理組顯著下降；雄性唾液腺蛋白預處理的與陰性對照組沒有區(qū)別。
　　2：雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白可以誘導小鼠腹腔液細胞，小鼠的脾淋巴細胞，人的外周血單核細胞（PBMC），細胞株RAW264.7，THP-1發(fā)生凋亡；雄性騷擾阿蚊唾液腺蛋白未誘導宿主免疫細胞發(fā)生凋亡。
　　3：雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白誘導F

6、as受體表達上調，但未激活caspase-8，p38抑制劑可以抑制騷擾阿蚊唾液腺蛋白誘導的小鼠腹腔液細胞凋亡。
　　結論：
　　1：雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋白誘導免疫細胞凋亡，但沒有嚴格的宿主和免疫細胞的特異性。
　　2：騷擾阿蚊傳播疾病的機制，在一定程度上依賴于雌蚊唾液腺蛋白誘導免疫細胞凋亡，干擾宿主的免疫反應。
　　3:Fas受體，caspase-3, caspase-8,p38 MAPK參與雌性騷擾阿蚊唾液腺蛋