小麥麩皮多糖對巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟献钤缭耘嗟霓r(nóng)作物之一屬禾本科單子葉植物綱植物。已有文獻報道小麥麩皮中含有的膳食纖維具有降血糖、降低血清膽固醇、預(yù)防便秘、調(diào)節(jié)血糖水平及免疫調(diào)節(jié)的生理功能，但關(guān)于小麥麩皮多糖在細(xì)胞分子水平的免疫調(diào)節(jié)作用及機制鮮有報道。本文以小麥麩皮（淮麥33）為實驗材料，首先研究不同提取方法對小麥麩皮多糖提取率、提取后麩皮殘渣微觀形態(tài)、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白質(zhì)含量、單糖組成及免疫調(diào)節(jié)活性的影響;其次，通過體外實驗研究小麥麩皮多糖對巨噬細(xì)

2、胞RAW264.7細(xì)胞毒性、分泌細(xì)胞因子NO、PGE2、TNF-α水平等細(xì)胞活性的變化，驗證其免疫調(diào)節(jié)作用及從小麥麩皮多糖在RAW264.7細(xì)胞中引起iNOS、COX-2、TNF-α的mRNA表達量及其蛋白表達情況的變化來探究可能的活化分子機制，并通過建立免疫抑制小鼠模型，小麥麩皮多糖灌胃小鼠，用ELISA試劑盒法檢測IL-2及IFN-γ的分泌水平，測定小鼠脾臟和胸腺指數(shù)，探討小麥麩皮多糖對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。最后，利用DEAE

3、-52纖維素柱層析及葡聚糖凝膠G-100柱層析對初步純化的小麥麩皮多糖進一步純化分級;同時，通過高效液相色譜(HPLC)和氣相色譜分析(GC)測定純化后小麥麩皮多糖的分子量大小及其單糖的組成、物質(zhì)的量之比;利用紅外光譜對小麥麩皮多糖初步結(jié)構(gòu)進行解析，研究小麥麩皮多糖結(jié)構(gòu)與其藥理活性之間的關(guān)系。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　(1)不同提取方法提取的小麥麩皮多糖，堿提法獲得的粗多糖得率最高為31.73％，其含量為57.79％;糖

4、醛酸和硫酸根的含量依次為:堿提法＞酶提法＞酸提法＞水提法;四種提取方法所得小麥麩皮多糖均由阿拉伯糖、木聚糖及葡萄糖組成;MTT法檢測四種方法所得小麥麩皮多糖對細(xì)胞均無毒性，其中水提法獲得的多糖能顯著促進RAW264.7細(xì)胞分泌NO因子并能促進細(xì)胞iNOS和COX-2蛋白的表達。
　　(2)體外實驗研究結(jié)果表明:小麥麩皮多糖對巨噬細(xì)胞RAW264.7無毒性作用，且小麥麩皮多糖可通過調(diào)節(jié)NF-κB、AP-1、p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

5、促進巨噬細(xì)胞的免疫功能。此外，體內(nèi)實驗結(jié)果顯示:小麥麩皮多糖能夠增強環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的胸腺和脾臟器官指數(shù)，并上調(diào)細(xì)胞因子的分泌水平。
　　(3)小麥麩皮水溶性粗多糖經(jīng)分離純化后得到3個組分CWBP-l、CWBP-2、CWBP-3;通過HPLC測得純化后小麥麩皮多糖的3個組分的平均分子量大小分別是182.73 kDa、90.104 kDa、40.721 kDa; GC測得小麥麩皮多糖3個組分均由阿拉伯糖和木糖組成，其摩爾質(zhì)量