間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、背景：間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是骨髓中不同于造血干細(xì)胞的具有多向分化的干細(xì)胞，近年來(lái)研究表明MSCs不僅在支持造血、器官移植中發(fā)揮作用，還發(fā)現(xiàn)MSCs對(duì)T/B淋巴細(xì)胞有顯著的免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用，但其免疫抑制的機(jī)制目前并不清楚。 研究目的：探討B(tài)ALB/c小鼠MSCs或MSCs聯(lián)合雷帕霉素(Rapa)對(duì)鼠脾淋巴細(xì)細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用，以及人MSCs對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血T淋巴細(xì)

2、胞的免疫調(diào)節(jié)作用，為MSCs的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)方法：(1)小鼠實(shí)驗(yàn)部分：常規(guī)分離培養(yǎng)BALB/c鼠的MSCs，實(shí)驗(yàn)前用直線加速器(15GY)預(yù)處理。分離BALB/c鼠脾淋巴細(xì)胞，分別用刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)作為脾T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的刺激劑。分組：脾細(xì)胞組(陽(yáng)性對(duì)照組)，脾細(xì)胞+MSCs1組(脾細(xì)胞：MSCs =1：0.01)，脾細(xì)胞+MSCs2組(脾細(xì)胞：MSCs=1：0.02)，脾細(xì)胞+MSCs3

3、 組(脾細(xì)胞：MSCs=1：0.2)。脾細(xì)胞+MSCs(脾細(xì)胞：MSCs=1：0，02)+雷帕霉素(Rapa.，終濃度為80ng/ml)組，脾細(xì)胞+Rapa組。采用MTT法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞增殖的吸光值(D值)，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)T、B淋巴細(xì)胞CD69、CD28和CD86的表達(dá)和T淋巴細(xì)胞凋亡情況，實(shí)時(shí)定量RT-PCR (Real-time RT-PCR)測(cè)定T淋巴細(xì)胞IFN-γ、IL-10mRNA的表達(dá)水平。(2)SLE患者實(shí)驗(yàn)部分

4、：分離培養(yǎng)健康人MSCs，并用直線加速器(15GY)進(jìn)行預(yù)處理。分離健康人和SLE患者外周血T淋巴細(xì)胞，在植物血凝素(PHA)刺激下，將人MSCs與T淋巴細(xì)胞作用。分組：T淋巴細(xì)胞組(陽(yáng)性對(duì)照組)，T淋巴細(xì)胞+MSCs1組(脾細(xì)胞：MSCs=1：0.01)，T淋巴細(xì)胞+MSCs2組(T淋巴細(xì)胞：MSCs=1：0.02)，T淋巴細(xì)胞+MSCs3組(T淋巴細(xì)胞：MSCs=1：0.2)。采用MTT法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞增殖， FCM檢測(cè)T淋巴細(xì)胞C

5、D152、CD28的表達(dá)，Real-time PCR測(cè)定IFN-γ和IL-6 mRNA的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)MSCs-能明顯抑制ConA和LPS刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖(P＜0.01)，抑制T淋巴細(xì)胞凋亡(P＜0.01)，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞IFN-γ mRNA表達(dá)、抑制IL-10 mRNA表達(dá)(P＜0.01)。隨MSCs數(shù)量增加，作用更加明顯。 (2)Rapa有協(xié)同MSCs抑制脾淋巴細(xì)胞的增殖、協(xié)同抑制T淋巴細(xì)胞凋亡、協(xié)同促進(jìn)IFN

6、-γ mRNA表達(dá)和協(xié)同抑制IL-10 mRNA表達(dá)(P＜0.05)。MSCs或MSCs聯(lián)合Rapa對(duì)T、B淋巴細(xì)胞CD69、CD28和 CD86的表達(dá)均無(wú)明顯影響(P＞0.05)。(3)人MSCs可明顯抑制健康人和SLE患者的T淋巴細(xì)胞增殖(P＜0.01)，其抑制作用與MSCs的數(shù)量成正相關(guān)。MSCs對(duì)健康人和SLE患者的CD3+CD152+細(xì)胞以及健康人CD3+CD28+細(xì)胞無(wú)顯著影響，MSCs對(duì)SLE患者T淋巴細(xì)胞的CD28表達(dá)有