唾液腺腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系CSCs亞群的篩選鑒定.pdf

1、目的:運(yùn)用Q-PCR技術(shù)檢測(cè)以ABCG2為標(biāo)記物流式細(xì)胞儀分選前后ACC-M細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與腫瘤干細(xì)胞(CSCs)相關(guān)標(biāo)記物表達(dá)情況，初步篩選唾液腺腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系腫瘤干細(xì)胞亞群，并結(jié)合EMT與CSCs學(xué)說討論其意義。
　　方法:
　　(1)10ng/ml TGF-β1誘導(dǎo)培養(yǎng)ACC-M細(xì)胞72h，Q-PCR監(jiān)測(cè)ACC-M細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)記物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、

2、MMP-2及CSCs相關(guān)標(biāo)記物Bmi-1、Oct-4、CD44、CD24表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TGF-β1對(duì)ACC-M細(xì)胞中ABCG2+細(xì)胞比例的調(diào)節(jié)變化。
　　(3)以ABCG2為標(biāo)記物，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)前后ACC-M細(xì)胞進(jìn)行分選，實(shí)驗(yàn)共分為6組，即A1:TGF-β1誘導(dǎo)-、B1:TGF-β1誘導(dǎo)+、A2:TGF-β1誘導(dǎo)-ABCG2+、B2:TGF-β1誘導(dǎo)+ABCG2+、A3:TGF

3、-β1誘導(dǎo)-ABCG2-、B3:TGF-β1誘導(dǎo)+ABCG2-,Q-PCR檢測(cè)6組細(xì)胞EMT及CSCs相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　(1) EMT相關(guān)標(biāo)記物:上皮表型標(biāo)記物E-cadherin隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸減弱，間質(zhì)表型標(biāo)記物N-cadherin與Vimentin、EMT輔助因子MMP-2隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增強(qiáng);CSCs相關(guān)標(biāo)記物:轉(zhuǎn)錄因子Oct-4、粘附分子CD24隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸減弱，原癌基因

4、Bmi-1、粘附CD44隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增強(qiáng);EMT的發(fā)生與CSCs相關(guān)標(biāo)記物表達(dá)密切相關(guān)。
　　(2)經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)后，ABCG2+細(xì)胞比例由3.06％增加至6.66％。
　　(3)誘導(dǎo)前后未分選組、ABCG2+組及ABCG2-組各指標(biāo)表達(dá)情況:①誘導(dǎo)前后，上皮表型標(biāo)記物E-cadherin均在ABCG2-組表達(dá)最高，未分選組表達(dá)稍低，ABCG2+組表達(dá)最低;②誘導(dǎo)前后，間質(zhì)表型標(biāo)記物N-cadherin、EMT

5、輔助因子MMP-2、原癌基因Bmi-1及轉(zhuǎn)錄因子Oct-4均在ABCG2-組表達(dá)最低，未分選組表達(dá)稍高，ABCG2+組表達(dá)最高;③粘附分子CD44誘導(dǎo)前在各組表達(dá)無明顯差異，而誘導(dǎo)后則表現(xiàn)為ABCG2+組最高，ABCG2-組與未分選組表達(dá)無明顯差異;④誘導(dǎo)前后，間質(zhì)表型標(biāo)記物Vimentin與粘附分子CD24在三組的表達(dá)均無明顯差異。未分選組、ABCG2+組及ABCG2-組誘導(dǎo)前后均表現(xiàn)為:①TGF-β1誘導(dǎo)組較未誘導(dǎo)組低表達(dá)E-cad

6、herin、Oct-4、CD24;②TGF-β1誘導(dǎo)組較未誘導(dǎo)組高表達(dá)N-cadherin、Vimentin、MMP-2、Bmi-1及CD44。
　　結(jié)論:
　　(1) TGF-β1可誘導(dǎo)ACC-M細(xì)胞發(fā)生EMT; EMT發(fā)生同時(shí)，伴隨有ACC-M細(xì)胞中SPCs亞群表型表達(dá)增強(qiáng)，且SPCs較非SPCs更易發(fā)生EMT改變。
　　(2) Bmi-1、Oct-4、CD44與CD24參與ACC-M細(xì)胞中CSCs亞群比例的調(diào)節(jié)，