唾液腺腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移細胞系CSCs亞群的篩選鑒定.pdf

1、目的:運用Q-PCR技術(shù)檢測以ABCG2為標記物流式細胞儀分選前后ACC-M細胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與腫瘤干細胞(CSCs)相關(guān)標記物表達情況，初步篩選唾液腺腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移細胞系腫瘤干細胞亞群，并結(jié)合EMT與CSCs學說討論其意義。
　　方法:
　　(1)10ng/ml TGF-β1誘導培養(yǎng)ACC-M細胞72h，Q-PCR監(jiān)測ACC-M細胞EMT相關(guān)標記物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、

2、MMP-2及CSCs相關(guān)標記物Bmi-1、Oct-4、CD44、CD24表達的動態(tài)變化。
　　(2)流式細胞術(shù)檢測TGF-β1對ACC-M細胞中ABCG2+細胞比例的調(diào)節(jié)變化。
　　(3)以ABCG2為標記物，應用流式細胞術(shù)對TGF-β1誘導前后ACC-M細胞進行分選，實驗共分為6組，即A1:TGF-β1誘導-、B1:TGF-β1誘導+、A2:TGF-β1誘導-ABCG2+、B2:TGF-β1誘導+ABCG2+、A3:TGF

3、-β1誘導-ABCG2-、B3:TGF-β1誘導+ABCG2-,Q-PCR檢測6組細胞EMT及CSCs相關(guān)標記物的表達情況。
　　結(jié)果:
　　(1) EMT相關(guān)標記物:上皮表型標記物E-cadherin隨誘導時間延長表達逐漸減弱，間質(zhì)表型標記物N-cadherin與Vimentin、EMT輔助因子MMP-2隨誘導時間延長表達逐漸增強;CSCs相關(guān)標記物:轉(zhuǎn)錄因子Oct-4、粘附分子CD24隨誘導時間延長表達逐漸減弱，原癌基因

4、Bmi-1、粘附CD44隨誘導時間延長表達逐漸增強;EMT的發(fā)生與CSCs相關(guān)標記物表達密切相關(guān)。
　　(2)經(jīng)TGF-β1誘導后，ABCG2+細胞比例由3.06％增加至6.66％。
　　(3)誘導前后未分選組、ABCG2+組及ABCG2-組各指標表達情況:①誘導前后，上皮表型標記物E-cadherin均在ABCG2-組表達最高，未分選組表達稍低，ABCG2+組表達最低;②誘導前后，間質(zhì)表型標記物N-cadherin、EMT

5、輔助因子MMP-2、原癌基因Bmi-1及轉(zhuǎn)錄因子Oct-4均在ABCG2-組表達最低，未分選組表達稍高，ABCG2+組表達最高;③粘附分子CD44誘導前在各組表達無明顯差異，而誘導后則表現(xiàn)為ABCG2+組最高，ABCG2-組與未分選組表達無明顯差異;④誘導前后，間質(zhì)表型標記物Vimentin與粘附分子CD24在三組的表達均無明顯差異。未分選組、ABCG2+組及ABCG2-組誘導前后均表現(xiàn)為:①TGF-β1誘導組較未誘導組低表達E-cad

6、herin、Oct-4、CD24;②TGF-β1誘導組較未誘導組高表達N-cadherin、Vimentin、MMP-2、Bmi-1及CD44。
　　結(jié)論:
　　(1) TGF-β1可誘導ACC-M細胞發(fā)生EMT; EMT發(fā)生同時，伴隨有ACC-M細胞中SPCs亞群表型表達增強，且SPCs較非SPCs更易發(fā)生EMT改變。
　　(2) Bmi-1、Oct-4、CD44與CD24參與ACC-M細胞中CSCs亞群比例的調(diào)節(jié)，