反應(yīng)停對(duì)膽囊癌細(xì)胞的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討反應(yīng)停對(duì)膽囊癌細(xì)胞的敏感性及作用和其對(duì)細(xì)胞周期的影響以及反應(yīng)停和5-Fu的聯(lián)合作用。 方法：體外培養(yǎng)膽囊癌細(xì)胞GBC-SD，采用不同濃度的反應(yīng)停對(duì)膽囊癌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，(1)用MTT法檢測各次的抑制率并算出中效濃度，并檢測反應(yīng)停與5-Fu聯(lián)合作用對(duì)GBC-SD細(xì)胞的抑制情況；(2)應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞生長曲線；(3)應(yīng)用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察反應(yīng)停作用后細(xì)胞形態(tài)的變化及超微結(jié)構(gòu)變化；(4)用流式細(xì)胞儀檢測反應(yīng)停對(duì)

2、膽囊癌細(xì)胞各周期的影響，并測出細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：(1)不同濃度的反應(yīng)停對(duì)膽囊癌細(xì)胞的抑制率不同，細(xì)胞的抑制率與反應(yīng)停濃度呈劑量依賴性，半數(shù)抑制濃度為19.44μmol/L。反應(yīng)停與5-Fu聯(lián)合用藥對(duì)GBC-SD細(xì)胞的兩藥相互作用系數(shù)均小于1，20 μmol/L的反應(yīng)停和20 μmol/L的5-Fu的兩藥相互作用系數(shù)最小，為0.71。(2)臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測：10 μmol/L的反應(yīng)停干預(yù)組細(xì)胞出現(xiàn)生長速度稍有減慢，但作用不明顯

3、； 20μmol/L、40 μmol/L的反應(yīng)停干預(yù)組出現(xiàn)活細(xì)胞數(shù)量下降，細(xì)胞明顯抑制(P<0.01)。20 μmol/L的反應(yīng)停能夠抑制細(xì)胞的生長，第二天表現(xiàn)抑制作用最明顯；40 μmol/L的反應(yīng)停能夠抑制并直接殺死細(xì)胞，表現(xiàn)為第二天后細(xì)胞數(shù)量沒有增加反而減少。(3)反應(yīng)停作用48小時(shí)后用顯微鏡觀察。光學(xué)顯微鏡下可見細(xì)胞數(shù)目減少；胞漿透亮度下降，細(xì)胞體積變小，變圓形。電子顯微鏡下可見細(xì)胞核染色質(zhì)凝聚深染，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體腫脹，內(nèi)部結(jié)構(gòu)

4、混亂。并可見核固宿、核碎裂，及凋亡小體的形成等細(xì)胞凋亡的表現(xiàn)。(4)流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)：①不同濃度反應(yīng)停作用GBC-SD后G。/G。期所占的比例是不同的，隨著反應(yīng)停濃度的增加，G0/G1期所占的比例逐步上升，而細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)逐步下降。②AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記法檢測，隨藥物濃度的增加，細(xì)胞的凋亡率逐步增加，且差異明顯(P<0.05)；在相同的藥物濃度下，24小時(shí)的細(xì)胞凋亡率明顯低于48小時(shí)的細(xì)胞凋亡率(P<0.05)