Hsa-miR-29c調(diào)控人膽囊癌細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　膽囊癌是膽道系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率占消化道腫瘤的7位。由于膽囊癌細(xì)胞能較快地通過直接浸潤、淋巴轉(zhuǎn)移、血運(yùn)轉(zhuǎn)移等方式在早期發(fā)生廣泛擴(kuò)散，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已是中晚期，根治性手術(shù)切除率低，預(yù)后極差，中位生存期小于1年。MicroRNA(miRNA)是一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼小RNA分子，它們能夠通過與靶基因的mRNA分子從而起到對(duì)靶基因的調(diào)控作用。已有大量報(bào)道發(fā)現(xiàn)這種小RNA分子幾乎參與調(diào)控了細(xì)胞生命周期中所以的關(guān)鍵步驟，

2、但在膽囊癌領(lǐng)域研究較少。
　　方法：
　　1、通過高通量Agilent人類miRNA芯片(V.19.0)檢測膽囊癌組織及其相對(duì)應(yīng)的癌旁組織中miRNA的表達(dá)譜，選擇表達(dá)量顯著異常的miRNA作為研究對(duì)象。
　　2、通過使用Real-Time PCR方法檢測40例膽囊癌組織及其癌旁組織中miR-29c-5p的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，miR-29c-5p在腫瘤組織中異常低表達(dá)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)miR-29c-5p與膽囊癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。<

3、br>　　3、體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-29c-5p調(diào)控膽囊癌細(xì)胞增殖及抑制其浸潤轉(zhuǎn)移的能力，這一現(xiàn)象可能是由miR-29c-5p抑制膽囊癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)所調(diào)控的。
　　4、MiR-29c-5p的靶基因的確定:結(jié)合miRDB和miRanda等生物信息學(xué)預(yù)測與雙熒光素酶報(bào)告基因方法檢測miR-29c-5p對(duì)靶基因3'UTR的結(jié)合作用，Western blot在蛋白水平檢測其對(duì)靶基因的抑制作用，免疫組化檢測SPOCK1基因

4、和膽囊癌患者預(yù)后的關(guān)系。
　　5、SPOCK1作為miR-29c-5p的靶基因在miR-29c-5p的生物學(xué)功能中的作用:SPOCK1在miR-29c-5p對(duì)膽囊癌細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用—SPOCK1過表達(dá)質(zhì)粒和miR-29c-5p共轉(zhuǎn)染后進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn);Western blot驗(yàn)證EMT相關(guān)指標(biāo)。
　　結(jié)果：
　　1、通過膽囊癌差異性表達(dá)檢測確定miR-29c-5p為核心的膽囊癌相關(guān)miRNA;

5、>　　2、體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)證明miR-29c-5p過表達(dá)通過調(diào)控EMT抑制膽囊癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，并抑制膽囊癌細(xì)胞的增殖;
　　3、SPOCK1被證實(shí)為miR-29c-5p的靶基因;
　　4、SPOCK1在膽囊癌中起癌基因作用，并且在miR-29c-5p的抑癌作用中起關(guān)鍵作用。
　　結(jié)論：
　　MiR-29c-5p通過靶向SPOCK1在膽囊癌的生長和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，提示干預(yù)miR-29c-5p可能成為膽囊癌治療的重要