廣西豬萎縮性鼻炎流行病學(xué)調(diào)查及豬多殺性巴氏桿菌OMPH基因的克隆與序列分析.pdf

1、本試驗根據(jù)Bb的Flagellin gene基因和T<'+>Pm的toxA基因分別設(shè)計了一對特異性引物(B1/B2和TOXA2/TOXA3)，以構(gòu)建AR多重PCR檢測體系。結(jié)果顯示該多重PCR具有非常高的特異性和敏感性。利用構(gòu)建的多重PCR方法對廣西10個縣市豬場采來的353份鼻拭子進(jìn)行檢測，結(jié)果T<'+>Pm PCRgB性數(shù)為110份，Bb PCR陽性數(shù)為59份。T<'+>Pm和Bb不但從表現(xiàn)AR臨床癥狀的豬體內(nèi)檢出，而且在不表現(xiàn)任何

2、臨床癥狀的豬體內(nèi)也分離出該病原體，數(shù)據(jù)表明廣西豬場感染T<'+>Pm和Bb的情況十分普遍，且以局部地區(qū)爆發(fā)(崇左、玉林、陸川)和極大部分地區(qū)隱性感染為主。AR在廣西范圍內(nèi)的分布情況：桂東南(貴港、玉林、陸川、博白)、南寧及周邊縣市(武鳴、扶綏、崇左)、桂北(柳州)、桂南(合浦)AR感染情況都比較嚴(yán)重，調(diào)查結(jié)果有助于豬場盡快采取措施凈化AR。由此可見建立AR的T<'+>Pm和Bb的多重PCR方法對廣西進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，是非常必要的，對廣西

3、養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展具有重大的意義。 OMPH是多殺性巴氏桿菌的主要外膜蛋白，OMPH在致病菌對宿主的感染和致病過程中起著重要的作用。試驗另外設(shè)計引物OMPH3/OMPH4．成功地對廣西8株P(guān)m的OMPH基因進(jìn)行了PCR擴增、克隆和測序。取其中OMPH基因的ORF核苷酸序列并推導(dǎo)其氨基酸序列，與GeneBank上公開發(fā)表的其它OMPH基因序列進(jìn)行同源性比較和遺傳進(jìn)化樹分析，結(jié)果顯示：這8株廣西Pm的OMPH基因可分為2個群：Ⅰ群和Ⅱ群，

4、Ⅰ群包括：GXHP、 GXCZ、GXLZ、GXFS、GXWM，GXNN，GXGG，GXYL單獨為Ⅱ群。氨基酸殘基中Ⅱ群的特異性變化位點有第45、46、82、83、85、91、 101、182、188、218、223、258、272、322、324、326位。8株 OMPH基因編碼區(qū)核苷酸及推導(dǎo)的氨基酸序列同源性的比較結(jié)果都分別在 90.9-100％之間，具有很高的同源性。通過分析結(jié)果以了解廣西Pm的OMPH基因與其它毒株在遺傳特點、進(jìn)化