芪白平肺膠囊防治慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證的實驗研究.pdf

1、1目的：
　　在中醫(yī)基礎(chǔ)理論“肺主治節(jié)”的指導(dǎo)下，通過動物實驗研究慢性阻塞性肺疾病發(fā)生“肺氣虛失治節(jié)”與缺氧導(dǎo)致肺血管收縮之間的關(guān)系，分析和進一步總結(jié)慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證的中醫(yī)學(xué)病機學(xué)內(nèi)容。通過動物實驗并結(jié)合國內(nèi)外學(xué)者造慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的方法，建立了慢阻肺痰瘀阻肺證的病證結(jié)合的模型大鼠，并應(yīng)用院內(nèi)制劑中藥復(fù)方芪白平肺膠囊進行藥物干預(yù)達益氣化痰祛瘀之效，從動物實驗角度系統(tǒng)觀察COPD痰瘀阻肺證模型大鼠實驗前后肺功能、血

2、流動力學(xué)、血清細胞因子、肺動脈和組織的相關(guān)蛋白如NF-kB、及ETA受體和ETB受體mRNA水平變化與肺血管收縮關(guān)系。通過以芪白平肺膠囊有效干預(yù)實現(xiàn)治節(jié)重建，抑制肺血管收縮，降低肺動脈高壓，從而探討芪白平肺膠囊干預(yù)COPD肺血管收縮的起效途徑和作用靶點。
　　2方法：
　　2.1理論研究
　　系統(tǒng)搜集整理古今肺脹（COPD痰瘀阻肺證）相關(guān)文獻，篩選和總結(jié)慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證發(fā)病機制的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀，初步探討中藥復(fù)

3、方芪白平肺膠囊預(yù)防和治療慢性阻塞性肺疾病導(dǎo)致低氧性肺血管收縮與重構(gòu)的起效途徑和作用靶點，以揭示中藥復(fù)方芪白平肺膠囊截斷和逆轉(zhuǎn)慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證病程的相關(guān)作用機理，進一步豐富慢性阻塞性肺疾病的中醫(yī)藥防治學(xué)理論基礎(chǔ)。
　　2.2實驗研究
　　將大鼠隨機分組為正常組（60只）、模型組（60只）、尼可地爾預(yù)防組（40只），芪白平肺膠囊預(yù)防組（40只）、尼可地爾治療組（40只）芪白平肺膠囊治療組（40只）。參照李澤庚、肖詩亮造

4、模方法建立COPD痰瘀阻肺證的動物模型。從開始實驗的第一天，就對各組COPD痰瘀阻肺證大鼠除正常組之外的按上述方法建立模型，每日造模復(fù)制結(jié)束后予模型大鼠灌胃。模型組和正常組每日連續(xù)生理鹽水灌胃10ml/kg，予四周末、八周末、十二周末分別取材20只。預(yù)防組在造模同時進行藥物干預(yù)，灌胃4周后取材20只大鼠，剩下20只停止灌胃再正常喂養(yǎng)4周后取材（實驗第8周末取材），治療組在造模成功后繼續(xù)進行藥物干預(yù)，灌胃4周后（實驗第8周末取材）取材20

5、只大鼠，剩下20只停止灌胃再正常喂養(yǎng)4周后取材（實驗第12周末取材）。灌胃藥物劑量：芪白平肺膠囊藥液10 mL/kg（每毫升含芪白平肺膠囊內(nèi)容物50 mg，相當于臨床劑量7倍），尼可地爾10 mL/kg（每毫升含尼可地爾0.3 mg，相當于臨床劑量7倍）。取內(nèi)容物藥粉用生理鹽水配成所需濃度的混懸液，給藥容量均為10 mL/kg。觀察慢阻肺痰瘀阻肺證大鼠肺功能、血流動力學(xué)的變化、血清細胞因子的變化、肺組織核轉(zhuǎn)錄因子-KB蛋白含量的變化以及

6、肺組織ETA受體和ETB受體mRNA的轉(zhuǎn)錄水平的變化。所有實驗數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　3結(jié)果：
　　3.1理論研究結(jié)果
　　肺主治節(jié)的內(nèi)涵高度概括了肺的主要生理功能。達到穩(wěn)定和協(xié)調(diào)的自身內(nèi)環(huán)境依賴于肺臟的治理和調(diào)節(jié)。達到全身上下氣、血、水的升降出入平衡的目的。導(dǎo)致慢阻肺痰瘀阻肺證發(fā)生的主要機理就是肺失治節(jié)；抗炎和減緩氣道重塑的進程就相當于肺的治節(jié)重建的過程，可以通過多種途徑干預(yù)肺血管收縮及結(jié)構(gòu)重

7、建，保護血管內(nèi)皮細胞，抑制肺血管收縮，從而改善右心功能和肺功能，達到降低肺血管阻力和肺動脈高壓的作用。本論文通過理論研究明確慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證的基本病機為治節(jié)失常，實驗結(jié)果表現(xiàn)為氣虛-痰飲-血瘀，三者互結(jié)相膠互為因果。既往研究表明，慢阻肺到時缺氧致肺動脈高壓的階段，就是相當于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證階段，“肺失治節(jié)”的典型表現(xiàn)就相當于我們提出的慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺證階段，進而提出益氣、化痰、祛瘀的治則就是指肺的治節(jié)

8、重建方法。
　　3.2實驗研究結(jié)果
　　3.2.1慢阻肺痰瘀阻肺證大鼠肺功能、血流動力學(xué)的變化及芪白平肺膠囊對其的影響
　　3.2.1.1肺功能：
　　從預(yù)防方面：與正常組比較，模型組FEV0.3、FVC、FEV0.3/FVC較正常組下降（P﹤0.01）；與模型組比較，芪預(yù)組、尼預(yù)組FEV0.3、FVC、FEV0.3/FVC、均顯著提高（P＜0.01）；與芪預(yù)組比較，造模同時給藥四周時與尼預(yù)組FEV0.3、FVC

9、差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01或P＜0.05），F(xiàn)EV0.3/FVC無差異（P＞0.05）；停藥四周時與尼預(yù)組FEV0.3、FVC差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01或P＜0.05），F(xiàn)EV0.3/FVC無差異（P＞0.05）。
　　從治療方面：與正常組比較，模型組FEV0.3、FVC、FEV0.3/FVC較正常組下降（P﹤0.01）；與模型組比較，芪治組、尼治組FEV0.3、FVC、FEV0.3/FVC、均顯著提高（P＜0.01）；與

10、芪治組比較，造模同時給藥四周時與尼治組FEV0.3、FVC差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01或P＜0.05），F(xiàn)EV0.3/FVC無差異（P＞0.05）；停藥四周時與尼治組FEV0.3、FVC差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01或P＜0.05），F(xiàn)EV0.3/FVC無差異（P＞0.05）。3.2.1.2血液動力學(xué)檢測：
　　從預(yù)防方面：與正常組比較，模型組平均肺動脈壓(mPAP)和平均頸動脈壓(mCAP)顯著升高（P＜0.01）；與模型組比

11、較，芪預(yù)組、尼預(yù)組mPAP和mCAP均顯著降低（P＜0.01）；與芪預(yù)組比較，造模同時給藥四周時與尼預(yù)組mPAP、mCAP差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；停藥四周時與尼預(yù)組mPAP差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），mCAP有差異（P＜0.05）。
　　從治療方面：與正常組比較，模型組 mPAP和mCAP顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，芪治組、尼治組mPAP和mCAP均顯著降低（P＜0.01）；與芪治組比較，造模同時給藥四

12、周時與尼治組mPAP、mCAP差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；停藥四周時與尼治組mPAP差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），mCAP有顯著差異（P＜0.01）。
　　3.2.2慢阻肺痰瘀阻肺證大鼠血清細胞因子的變化及芪白平肺膠囊對其的影響
　　3.2.2.1大鼠血清中ET-1、HIF-1α含量測定結(jié)果
　　從預(yù)防方面：與正常組比較，模型組 ET-1與 HIF-1α含量顯著增加（P﹤0.01）；與模型組比較，芪預(yù)組、尼預(yù)

13、組ET-1與HIF-1α含量均降低（P＜0.01或 P＜0.05）；與芪預(yù)組比較，造模同時給藥四周時尼預(yù)組ET-1、HIF-1α差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；停藥四周時芪預(yù)組與尼預(yù)組ET-1、HIF-1α差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　從治療方面：與正常組比較，模型組 ET-1與 HIF-1α含量顯著增加（P﹤0.01）；與模型組比較，給藥四周后芪治組、尼治組 ET-1、HIF-1α含量均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P

14、＜0.01或 P＜0.05），停藥四周后芪治組 ET-1、HIF-1α含量顯著降低，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），與尼治組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與芪治組比較，給藥四周時尼治組ET-1、HIF-1α差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；停藥四周時與尼治組 ET-1差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），與尼治組 HIF-1α差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　3.2.2.2大鼠血清中CAM-2、VEGF含量測定結(jié)果

15、
　　從預(yù)防方面：與正常組比較，模型組 CAM-2含量顯著降低、VEGF含量顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）；與模型組比較，芪預(yù)組、尼預(yù)組CAM-2含量均升高，VEGF含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與芪預(yù)組比較，造模同時給藥四周時，尼預(yù)組CAM-2差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）、VEGF差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；停藥四周時與芪預(yù)組比較 CAM-2、VEGF差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01或 P

16、＜0.05）。
　　從治療方面：與正常組比較，模型組 CAM-2含量顯著降低、VEGF含量顯著增加差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）；與模型組比較，造模同時給藥四周時芪治組、尼治組CAM-2含量均升高，VEGF含量均顯著降低，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；停藥四周時CAM-2含量均升高，VEGF含量均降低，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與芪治組比較，造模同時給藥四周時尼治組CAM-2、VEGF差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P

17、＞0.05）；停藥四周時尼治組 CAM-2差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），VEGF差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.2.2.3大鼠血清中PDGF、TGF含量測定結(jié)果
　　從預(yù)防方面：與正常組比較，模型組PDGF與TGF含量均增加（P<0.01或P﹤0.05）；與模型組比較，芪預(yù)組、尼預(yù)組PDGF與TGF含量均降低（P<0.01或P<0.05）；與芪預(yù)組比較，造模同時給藥四周時尼預(yù)組PDGF差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0

18、.05）；TGF差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；停藥四周時與尼預(yù)組PDGF差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；TGF差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；
　　從治療方面：與正常組比較，模型組PDGF與TGF含量增加（P﹤0.01或P﹤0.05）；與模型組比較，造模同時給藥四周時芪治組、尼治組PDGF與TGF含量均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01或P<0.05），停藥四周時芪治組PDGF與TGF含量顯著降低，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（

19、P<0.01），與尼治組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與芪治組比較，造模同時給藥四周時尼治組PDGF差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），TGF差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；停藥四周時與尼治組 PDGF差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），與尼治組TGF差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　3.2.3慢阻肺痰瘀阻肺證大鼠肺組織NF-kB蛋白含量的變化及芪白平肺膠囊對其的影響
　　從預(yù)防方面：與正常組比較模型組NF-

20、kB平均吸光密度值明顯增加；與模型組相比，芪預(yù)組、尼預(yù)組大鼠肺組織NF-kB平均吸光密度值降低。較正常組、模型組均有顯著差異，(P＜0.01)。與芪預(yù)組比較，尼預(yù)組吸光密度值增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　從治療方面：與正常組比較，模型組NF-kB平均吸光密度值明顯增加；與模型組相比，芪治組、尼治組大鼠肺組織NF-kB平均吸光密度值降低。芪治組與尼治組組間比較無明顯差異，較正常組、模型組均有顯著差異，(P＜0．01)

21、。
　　3.2.4慢阻肺痰瘀阻肺證大鼠肺動脈PKC-α、Kri6.1和SUB2BmRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化及芪白平肺膠囊對其的影響
　　3.2.4.1大鼠肺動脈中PKC-α mRNA水平測定結(jié)果
　　從預(yù)防方面：與正常組相比，模型組大鼠肺動脈PKC-α mRNA基因表達明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，芪預(yù)組、尼預(yù)組PKC-αmRNA基因表達蛋白表達降低(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪預(yù)組比

22、較，尼預(yù)組PKC-α mRNA蛋白表達升高。芪預(yù)組與尼預(yù)組比較，造模同時給藥四周差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。停藥四周后尼預(yù)組PKC-αmRNA蛋白表達升高（P<0.01）
　　從治療方面：與正常組相比，模型組與芪治組、尼治組大鼠肺動脈PKC-α mRNA蛋白表達明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，芪治組、尼治組大鼠肺動脈PKC-α mRNA蛋白表達降低(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪治組比較，造

23、模四周后給藥四周尼治組 PKC-αmRNA蛋白表達減低（P<0.05）。停藥四周后芪治組、尼治組PKC-α mRNA蛋白表達均升高，尼治組PKC-α mRNA蛋白表達升高幅度更明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)
　　3.2.4.2大鼠肺動脈中Kri6.1 mRNA水平測定結(jié)果
　　從預(yù)防方面：結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組、芪預(yù)組和尼預(yù)組大鼠肺動脈Kri6.1 mRNA基因表達明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；

24、與模型組相比，芪預(yù)組、尼預(yù)組Kri6.1 mRNA基因表達蛋白表達明顯降低(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪預(yù)組比較，尼預(yù)組Kri6.1 mRNA蛋白表達升高（P<0.01或P＜0.05）。
　　從治療方面：結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組與芪治組、尼治組大鼠肺動脈Kri6.1 mRNA蛋白表達明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，芪治組、尼治組大鼠肺動脈Kri6.1 mRNA蛋白表達降低(P<0.01)，

25、差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪治組比較，造模四周后給藥四周與停藥四周后尼治組Kri6.1 mRNA蛋白表達均升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)
　　3.2.4.3大鼠肺動脈中SUB2B mRNA水平測定結(jié)果
　　從預(yù)防方面：結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組、芪預(yù)組和尼預(yù)組大鼠肺動脈SUB2B mRNA基因表達明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，芪預(yù)組、尼預(yù)組SUB2B mRNA基因表達蛋白表達明顯降低(P<

26、0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪預(yù)組比較，尼預(yù)組SUB2B mRNA蛋白表達升高（P<0.01或P＜0.05）。
　　從治療方面：結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組與芪治組、尼治組大鼠肺動脈SUB2B mRNA蛋白表達明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，芪治組、尼治組大鼠肺動脈SUB2B mRNA蛋白表達顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與芪治組比較，造模四周后給藥四周與停藥四周后尼治組SUB2B m

27、RNA蛋白表達均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)
　　3.2.4慢阻肺痰瘀阻肺證大鼠肺組織ETA受體和ETB受體mRNA的轉(zhuǎn)錄水平的變化及芪白平肺膠囊對其的影響
　　3.2.4.1大鼠肺動脈中ETA受體 mRNA水平測定結(jié)果
　　從預(yù)防方面：結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組、芪預(yù)組和尼預(yù)組大鼠肺動脈ETA受體mRNA基因表達明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組相比，芪預(yù)組、尼預(yù)組ETA受體mRNA基

28、因表達蛋白表達明顯降低(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪預(yù)組比較，尼預(yù)組ETA受體mRNA蛋白表達升高（P＜0.01或P＜0.05）。
　　從治療方面：結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組與芪治組、尼治組大鼠肺動脈ETA受體mRNA蛋白表達明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組相比，芪治組、尼治組大鼠肺動脈ETA受體mRNA蛋白表達降低(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪治組比較，造模四周后給藥四周與停藥四周后尼

29、治組ETA受體mRNA蛋白表達均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3.2.4.2大鼠肺動脈中ETB受體 mRNA水平測定結(jié)果
　　從預(yù)防方面：結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組、芪預(yù)組和尼預(yù)組大鼠肺動脈ETB受體mRNA基因表達明顯減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)；與模型組相比，芪預(yù)組、尼預(yù)組ETB受體mRNA基因表達蛋白表達明顯升高(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪預(yù)組比較，尼預(yù)組ETB受

30、體mRNA蛋白表達減低（P＜0.01或P＜0.05）
　　從治療方面：結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組與芪治組、尼治組大鼠肺動脈ETB受體mRNA蛋白表達明顯減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組相比，芪治組、尼治組大鼠肺動脈ETB受體mRNA蛋白表達升高(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與芪治組比較，造模四周后給藥四周與停藥四周后尼治組ETB受體mRNA蛋白表達均減低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)
　　4結(jié)

31、論：
　　芪白平肺膠囊與尼可地爾防治 COPD痰瘀阻肺證大鼠均有顯著療效。在有效的改善大鼠癥狀、體征的同時，顯著改善了大鼠肺功能、血流動力學(xué)；降低了血清細胞因子內(nèi)皮素-1（ET-1）、低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達，增加了鈣調(diào)節(jié)蛋白（CAM-2）的表達；減少肺組織中NF-kB的表達，降低了大鼠肺組織 ETA受體 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達水平，同時增加了大鼠肺組織ETB受體mRNA的轉(zhuǎn)錄水