市售食用花卉生物活性成分含量測(cè)定及其水提物抗氧化活性研究.pdf

1、我國(guó)具有豐富的天然食用花卉資源和大量的食用花卉文獻(xiàn)記載，食用花卉在我國(guó)的應(yīng)用已歷史悠久，它們的功效和安全性亦比較明確，某些食用花卉的功效與其生物活性成分及其抗氧化作用密切相關(guān)，常見食用花卉中的生物活性成分有酚類、黃酮類、皂苷類、多糖類、有機(jī)酸類、萜烯類化合物等。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在研究不同食用花卉中生物活性成分的含量，分析其水提物的抗氧化活性，并探討其抗氧化機(jī)制，為今后系統(tǒng)研究食用花卉生物活性物質(zhì)及其開發(fā)利用奠定一定的理論基礎(chǔ)。<

2、br>　　 目的：測(cè)定12種市售食用花卉中包括總黃酮、總皂苷和總甾體在內(nèi)的生物活性成分的含量；分析其水提物的體外抗氧化活性及其對(duì)高脂血癥大鼠的抗氧化作用，并利用大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧再給氧模型探討其可能的抗氧化機(jī)制。
　　 方法：（1）利用乙醇回流提取，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法測(cè)定食用花卉總黃酮的含量；利用超聲提取，香草醛-冰醋酸-硫酸分光光度法測(cè)定食刖花卉總皂苷的含量；利用石油醚回流提取，Lieber

3、mann-Burchard顯色法測(cè)定食用花卉總甾體的含量。（2）分別利用Fe3+還原試劑盒，F(xiàn)enton反應(yīng)試劑盒、黃嘌呤氧化酶反應(yīng)試劑盒及氧化自由基吸收能力（ORAC）方法進(jìn)行食用花卉水提物的總抗氧化活性、清除·OH、O2-能力及氧化自由基吸收能力的測(cè)定。（3）喂飼高脂飼料（飼料配方參照美國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)推薦的AIN-93M試驗(yàn)動(dòng)物合成飼料配方配制而成，該配方中的蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)的含量是保證動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的，在此基礎(chǔ)上適當(dāng)調(diào)

4、整蛋白質(zhì)和蔗糖的比例，增加飽和脂肪含量，制成高脂飼料）建立高脂血癥大鼠模型，觀察12種市售食用花卉水提物對(duì)高脂血癥大鼠的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)大鼠共分14組：陰性對(duì)照組，模型對(duì)照組，12種市售食用花卉水提物組（12組），除陰性對(duì)照組外其余各組均飼以高脂飼料，受試物各組分別給予不同的食用花卉水提物灌胃，連續(xù)喂養(yǎng)6周，測(cè)定血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、丙二醛（MDA）、

5、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）水平及其氧化自由基吸收能力，并取肝臟作病理切片。（4）采用第三代大鼠乳鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，建立細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型，觀察食用花卉水提物預(yù)處理對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)分為14組：①空白對(duì)照組：DMEM完全培養(yǎng)基，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時(shí)；②模型對(duì)照組：缺氧1h復(fù)氧1h；③食用花卉水提物組（12組）：每組分別加入不同的食用花卉水提物750μ gL-1

6、（DMEM完全培養(yǎng)基配制）孵育24小時(shí)后，缺氧1h復(fù)氧1h；然后，收集細(xì)胞上清液，待測(cè)其中SOD，MDA，乳酸脫氫酶（LDH）指標(biāo)，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：（1）生物活性成分測(cè)定的結(jié)果表明：所測(cè)12種食用花卉中均含有總黃酮、總皂苷和總甾體，但其含量差異較大，總黃酮含量最高的是丁香，為13.06％，野菊花（12.14％）、花卉槐花（10.09％）、茉莉花（10.09％）次之，梔子最低，僅為1.

7、33％；總皂苷的含量以梔子最高，為4.19％，茉莉花（3.53％）、野菊花（2.20％）、迷迭香（1.54％）次之，花卉紅花最低，僅為0.32％；總甾體的含量以野菊花最高，為1.02％，花卉紅花（0.85％）、菊花（0.78％）次之，勿忘我最低，其總甾體含量?jī)H為0.10％。
　　 （2）體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：總抗氧化能力最強(qiáng)的是金銀花，為2205.21U/g，迷迭香、丁香、勿忘我次之，厚樸花、茉莉花最低，最強(qiáng)最弱相差4.26倍

8、；清除·OH的能力以野菊花、菊花、勿忘我較強(qiáng)，均在1100U/g，丁香、花卉玫瑰最弱；清除O2-的能力以花卉玫瑰、迷迭香、菊花較強(qiáng)，丁香、梔子較弱，梔子的清除O2-能力僅為103.2U/g：花卉玫瑰的氧化自由基吸收能力最強(qiáng)，為861.87μmoleTE/g，丁香、迷迭香、花卉槐花次之，茉莉花的ORAC值最低?；ɑ芩嵛镏锌傸S酮的含量與其總抗氧化活性之間存在相關(guān)性，R為0.585。（3）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與高脂模型對(duì)照組相比，上述12種食

9、用花卉水提物能不同程度降低高脂血癥大鼠TG、TC、LDL-C水平，升高血清HDL-C這一保護(hù)性因子水平，而且能夠降低血清中MDA水平，提高SOD、GSH-PX活性及其ORAC值，減輕大鼠肝臟脂肪變性程度，效果以野菊花、厚樸花、菊花、花卉紅花等水提物組較為明顯。同時(shí)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，食用花卉水提物預(yù)處理能不同程度提高缺氧/復(fù)氧后細(xì)胞存活率，減少LDH，MDA釋放，提高SOD活性，野菊花、菊花和花卉紅花水提物能明顯減輕受損細(xì)胞的凋亡。<

10、br>　　 結(jié)論：（1）利用分光光度法測(cè)定了食用花卉中主要生物活性成分總黃酮、總皂苷和總甾體的含量，豐富了國(guó)內(nèi)外對(duì)于食用花卉的成分研究，為食用花卉的進(jìn)一步開發(fā)利用打下了基礎(chǔ)。（2）體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示食用花卉水提物具有一定的總抗氧化能力、清除羥基自由基能力、清除超氧陰離子自由基和氧化自由基吸收的能力，同時(shí)水提物中總黃酮的含量與其總抗氧化活性之間存在相關(guān)性，表明黃酮類物質(zhì)可能是其重要的功能成分，但也不排除多種抗氧化成分之間通過相加或協(xié)