新生24hSD乳鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化.pdf

1、目的：建立新生24h內(nèi)SD乳鼠海馬源性神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法，探討含或不含細(xì)胞因子的血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)海馬神經(jīng)干細(xì)胞分化的情況。
　　方法：（1）海馬神經(jīng)干細(xì)胞(hNSCs)分離、培養(yǎng)與鑒定；（2）①hNSCs的誘導(dǎo)分化并檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞特有的抗原標(biāo)志物檢測(cè)：分別檢測(cè)NSE/NF-200，GFAP，Galc的表達(dá)。②將hNSCs分為三組，按不同培養(yǎng)液誘導(dǎo)分化，三組均在同一條件下培養(yǎng)，3天后同時(shí)收集各組細(xì)胞的分化率，并測(cè)量各組分化的神經(jīng)細(xì)

2、胞胞體大小，以探索不同培養(yǎng)條件下對(duì)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。③電鏡下觀察hNSCs及誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)細(xì)胞。（3）流式檢測(cè)hNSCs細(xì)胞周期。
　　結(jié)果：（1）原代及傳代的神經(jīng)球nestin免疫熒光呈陽(yáng)性表達(dá)。（2）①誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)細(xì)胞NSE/NF-200、GFAP、Galc免疫熒光均成呈陽(yáng)性表達(dá)。②不同條件下培養(yǎng)3天后hNSCs的分化率，分別為對(duì)照組：（5.28士2.09）％；實(shí)驗(yàn)組1：（87.01士5.43）%；實(shí)驗(yàn)組2：（83.5

3、4士6.32）%，實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組均能誘導(dǎo)hNSCs分化，其分化率比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。分化的神經(jīng)細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)情況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。③電鏡下可觀察到hNSCs、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)。（3）hNSCs細(xì)胞周期顯示細(xì)胞周期完整。
　　結(jié)論：1.體外成功分離、培養(yǎng)并鑒定新生24h內(nèi)SD乳鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞。2.含或不含細(xì)胞因子（EGF、 bFGF）的血清培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)hNSC