人胚神經干細胞體外分化的實驗研究.pdf

1、目的:神經干細胞是近來神經科學研究的一大熱點,其分化尤其是定向分化問題是熱點中的熱點.決定神經干細胞分化方向的因素很多,近來研究發(fā)現(xiàn)很多細胞因子、神經干細胞所處局部微環(huán)境、神經干細胞本身產生的多種調控信號及某些特定基因均決定著神經干細胞的分化方向.該研究對人胚神經干細胞在成人腦脊液中的分化,及抗壞血酸的對其定向誘導分化作用進行了初步研究,并探討了其可能機制.方法:將體外原代培養(yǎng)的人胚來源的神經干細胞置入含有正常成人腦脊液培養(yǎng)基(DMEM

2、/F12+B27+30％CSF)使其分化,在分化的不同時間點對分化的細胞進行免疫細胞化學染色,計數(shù)產生的各類神經細胞的比例.將人胚中腦來源的神經干細胞體外長期培養(yǎng),每隔5-7天傳代一次.取不同代數(shù)的神經干細胞,種植入含有血清分化培養(yǎng)基(DMEM/F12+B27+10％胎牛血清)中或種植入含有一定濃度的抗壞血酸的分化培養(yǎng)基中(DMEM/F12+B27+10％胎牛血清+抗壞血酸)中,待其分化十天后,以免疫細胞化學方法觀測其分化細胞中TH(+