脊髓源性神經(jīng)干細胞培養(yǎng)及體外誘導分化實驗研究.pdf

1、本研究著眼于脊髓源性神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)、增殖及分化，為將來的自體移植提供了來源方便可靠的種子細胞，為進一步細胞移植治療SCI打下了一定的實驗基礎。 實驗一：為探討胚胎大鼠脊髓神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)及體外誘導分化的特點和規(guī)律，利用顯微解剖、無血清細胞培養(yǎng)技術在E12SD大鼠的胎鼠脊髓中分離出具有單細胞克隆能力的細胞，并進行傳代培養(yǎng)。同時觀察白血病抑制因子(LIF)對培養(yǎng)的脊髓源性神經(jīng)干細胞增殖和分化的影響。采用細胞免疫化學熒光方法進行

2、分化細胞類型鑒定，并計算各分化細胞的比例。 結(jié)果證實： 1.從E12天SD大鼠胚胎脊髓中成功分離出的神經(jīng)干細胞具有連續(xù)克隆能力，在表皮生長因子(EGF)，堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的作用下，脊髓源性NSCs快速增殖，形成多細胞組成的細胞球，將這些細胞球分離成單細胞重新培養(yǎng)，單個的細胞又很快變成細胞球。這些細胞表達神經(jīng)巢蛋白抗原。 2.雖然白血病抑制因子(LIF)不是脊髓源性NSCs培養(yǎng)所必需的，但是它可明

3、顯促進脊髓源性NSCs增殖。誘導分化實驗顯示：這些細胞可分化為神經(jīng)元、星型膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞，而LIF組則分化很少。因此，從胚胎大鼠脊髓分離神經(jīng)干細胞是可行的，這些細胞在體外經(jīng)多次傳代后仍具有較強的增殖能力和多向分化潛能，LIF可以促進脊髓源性NSC增殖并抑制其分化。 實驗二：探討嗅鞘細胞對脊髓源性神經(jīng)干細胞分化的作用。在實驗中應用Millicell插入式細胞培養(yǎng)皿，大鼠脊髓源性神經(jīng)干細胞與嗅鞘細胞在無血清培養(yǎng)液中共培養(yǎng)，通