脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的分離及BMP體外誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、本研究著眼于神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞主要是脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、增殖及分化，為脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。 實(shí)驗(yàn)第一部分：利用無血清培養(yǎng)和單細(xì)胞克隆技術(shù)在E14小鼠的胎鼠脊髓及紋狀體中分離出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞，并進(jìn)行培養(yǎng)、傳代觀察。采用間接免疫熒光檢測克隆細(xì)胞的神經(jīng)巢蛋白(nestin)抗原和分化后特異性成熟神經(jīng)細(xì)胞抗原的表達(dá)，并比較兩種來源的神經(jīng)干細(xì)胞在培養(yǎng)及分化方向上的異同點(diǎn)。得出以下結(jié)論：胎鼠的脊

2、髓和紋狀體中都存在具有自我更新能力和多分化潛能的神經(jīng)干細(xì)胞，二者在培養(yǎng)方法上和增殖條件上有一定的分別。從細(xì)胞的分化角度分析，脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞更適合用于進(jìn)行脊髓損傷的修復(fù)。 實(shí)驗(yàn)的第二部分，以上述無血清培養(yǎng)技術(shù)取孕14天的小鼠的胎鼠脊髓，原代培養(yǎng)出脊髓NSCs。培養(yǎng)四代后，得到了形狀、大小均一的細(xì)胞克隆團(tuán)，通過細(xì)胞的純度鑒定后，證實(shí)細(xì)胞90﹪以上為神經(jīng)干細(xì)胞。分別在bFGF存在與否的不同條件下，加入不同濃度的BMP-2，觀察細(xì)胞