脊髓神經(jīng)干細胞的分離及BMP體外誘導分化的研究.pdf

1、本研究著眼于神經(jīng)系統(tǒng)干細胞主要是脊髓源性神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)、增殖及分化，為脊髓源性神經(jīng)干細胞(NSCs)的臨床應用提供實驗證據(jù)。 實驗第一部分：利用無血清培養(yǎng)和單細胞克隆技術(shù)在E14小鼠的胎鼠脊髓及紋狀體中分離出具有單細胞克隆能力的細胞，并進行培養(yǎng)、傳代觀察。采用間接免疫熒光檢測克隆細胞的神經(jīng)巢蛋白(nestin)抗原和分化后特異性成熟神經(jīng)細胞抗原的表達，并比較兩種來源的神經(jīng)干細胞在培養(yǎng)及分化方向上的異同點。得出以下結(jié)論：胎鼠的脊

2、髓和紋狀體中都存在具有自我更新能力和多分化潛能的神經(jīng)干細胞，二者在培養(yǎng)方法上和增殖條件上有一定的分別。從細胞的分化角度分析，脊髓源性神經(jīng)干細胞更適合用于進行脊髓損傷的修復。 實驗的第二部分，以上述無血清培養(yǎng)技術(shù)取孕14天的小鼠的胎鼠脊髓，原代培養(yǎng)出脊髓NSCs。培養(yǎng)四代后，得到了形狀、大小均一的細胞克隆團，通過細胞的純度鑒定后，證實細胞90﹪以上為神經(jīng)干細胞。分別在bFGF存在與否的不同條件下，加入不同濃度的BMP-2，觀察細胞