胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和聽(tīng)囊細(xì)胞體外分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和聽(tīng)囊細(xì)胞體外分化為毛細(xì)胞的潛能；探討胚胎神經(jīng)干細(xì)胞在內(nèi)耳再生研究領(lǐng)域的價(jià)值。
　　 方法：分離孕9.5-10.5天C5786/L小鼠胚胎的后腦區(qū)域的神經(jīng)管組織和聽(tīng)囊組織，采用無(wú)血清培養(yǎng)，進(jìn)行體外培養(yǎng)、擴(kuò)增，并通過(guò)免疫熒光化學(xué)染色（巢蛋白）進(jìn)行鑒定。取傳至第4代神經(jīng)干細(xì)胞和聽(tīng)囊細(xì)胞，接種于蓋玻片上。添加血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)15天后行免疫熒光檢測(cè)，與RT-PCR檢測(cè)。觀察神經(jīng)干細(xì)胞和聽(tīng)囊細(xì)胞的體外分化特點(diǎn)。

2、r>　　 結(jié)果：采用無(wú)血清培養(yǎng)法成功地培養(yǎng)出胚胎神經(jīng)干細(xì)胞球和聽(tīng)囊細(xì)胞球，采用神經(jīng)球分析法收集細(xì)胞球進(jìn)行純化與傳代，免疫熒光檢測(cè)示：來(lái)源于神經(jīng)管和聽(tīng)囊的細(xì)胞球巢蛋白（nestin）表達(dá)陽(yáng)性，證實(shí)其都具有神經(jīng)干細(xì)胞的特點(diǎn)。添加含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)15天后，免疫熒光檢測(cè)證實(shí)所獲得的神經(jīng)干細(xì)胞和聽(tīng)囊細(xì)胞均可以在體外分化為表達(dá)毛細(xì)胞標(biāo)記物MyosinⅦa的細(xì)胞。
　　 結(jié)論：胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和聽(tīng)囊細(xì)胞能夠在體外培養(yǎng)的條件下分化為毛細(xì)胞樣細(xì)胞