LHRHa靶向鴉膽子油脂質體治療裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的實驗研究.pdf

1、第一部分、LHRHa靶向鴉膽子油脂質體的制備及質量評價
　　目的:制備LHRHa靶向鴉膽子油脂質體，并觀察其物理學特性及穩(wěn)定性。
　　方法:采用薄膜分散法結合生物素-鏈霉親和素橋接法制備LHRH靶向鴉膽子油脂質體，測定其粒徑、電位、包封率。以滲漏率為指標考察其穩(wěn)定性，并觀察其適宜的貯存溫度。
　　結果:通過正交設計篩選出制備LHRHa靶向鴉膽子油脂質體的最佳處方為:磷脂與膽固醇比例4∶1，藥脂比3∶10，DSPE-PE

2、G2000-Biotin與磷脂質量比為3％，超聲時間8min。LHRHa靶向鴉膽子油脂質體平均粒徑為(155.1±14.5) nm，Zeta電位為-（24.1±0.54）Mv，平均包封率達（92.2±1.59）％。離心加速實驗證實該脂質體穩(wěn)定性參數(shù)KE值變化較小。在4℃條件下放置15天為淺白色，脂質體無分層、沉淀現(xiàn)象;25℃室溫放置一周即出現(xiàn)大量絮狀沉淀，外觀渾濁。
　　結論:采用薄膜-超聲分散法結合生物素-鏈霉親和素橋接法成功制

3、備了LHRHa靶向鴉膽子油脂質體，粒徑均勻，包封率較高，在4℃條件下保存可提高其穩(wěn)定性。
　　第二部分、LHRHa靶向脂質體體內尋靶能力的初步研究
　　目的:觀察LHRHa靶向脂質體對裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的體內尋靶能力。
　　方法:采用細胞懸液注射法建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型，同時采用薄膜分散法制備空白脂質體、含香豆素-6（一種綠色熒光物質）的LHRHa靶向脂質體和普通香豆素-6脂質體。將建模后四周的裸鼠6只隨機分為

4、三組:空白脂質體組、香豆素-6脂質體組和LHRHa靶向香豆素-6脂質體組，每組2只。分別從尾靜脈注射入相應藥物，給藥4小時后在動物活體成像儀下觀察LHRHa靶向脂質體的體內尋靶能力。
　　結果:裸鼠卵巢癌皮下移植瘤動物模型易于建立。動物活體成像實驗中可以看到，LHRHa靶向香豆素-6脂質體組腫瘤部位熒光強度比香豆素-6熒光脂質體組更明顯，而空白脂質體組腫瘤部位未觀察到熒光。
　　結論:建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型方法簡單，是

5、研究卵巢癌靶向治療較為理想的動物模型。LHRHa靶向脂質體對卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有良好的體內尋靶能力。
　　第三部分、LHRHa靶向鴉膽子油脂質體對裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的治療作用及機制研究
　　目的:探討LHRHa靶向鴉膽子油脂質體對裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的抑制作用及其機制。
　　方法:采用細胞懸液注射法建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型，將28只裸鼠隨機分為四組（Ⅰ組PBS組，Ⅱ組鴉膽子油乳注射液組，Ⅲ組鴉膽子油脂質體組，

6、Ⅳ組為LHRHa靶向鴉膽子油脂質體組），每組7只。經過不同處理后，每組隨機抽2只裸鼠處死，剝取腫瘤組織做HE染色觀察腫瘤組織形態(tài)，同時用免疫組化法檢測Caspase3、Caspase8表達，用Western-blot法檢測各組腫瘤組織Caspase3、Caspase8、bax、bcl-2表達。余下的裸鼠觀察腫瘤生長情況及生存時間。
　　結果:Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組中位生存時間分別為(42.4±1.47)天，(46.0±1.18)天

7、，(52.0±1.40)天，(58.6±1.03)天。與Ⅰ組比較，Ⅲ組、Ⅳ組中位生存時間明顯延長(P＜0.05)。其中以Ⅳ組（LHRHa靶向脂質體組）最長，其中位生存時間明顯高于其他組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Ⅳ組腫瘤體積增長速度較Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組明顯減緩。Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組凋亡相關因子Caspase3和Caspase8、bax蛋白表達均高于Ⅰ組，以LHRHa靶向脂質體組最高(P＜0.05)。而Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組凋亡抑制因子bcl-2