和厚樸酚脂質(zhì)體治療卵巢癌的實驗研究.pdf

1、目的：卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中死亡率最高的腫瘤。近年來傳統(tǒng)的手術(shù)治療和放療手段似乎己處于平臺期，總的生存率沒有明顯的提高，尋找有效而毒性小的抗癌藥物一直是臨床化療的迫切要求。 和厚樸酚(honokiol)是一種從中藥厚樸中提取的小分子天然產(chǎn)物，在體內(nèi)、體外的實驗中能抑制多種腫瘤細胞的生長，具有抗增生、抗腫瘤作用，并影響多種酶的生物活性，是一種潛在的化療藥物。但由于和厚樸酚不溶于水，難于吸收，阻礙了它的進一步臨床應(yīng)用。脂質(zhì)體

2、作為新型藥物載體，能包裹抗生素、抗真菌藥、化療藥物、生物制劑等，能改變藥物的水溶性、體內(nèi)分布和體內(nèi)代謝。本實驗使用脂質(zhì)體包裹和厚樸酚，制備和厚樸酚脂質(zhì)體(honokiol encapsulated by pegylated liposomes，H-PEGL)，觀察其在體外和動物模型體內(nèi)的抗卵巢癌活性，比較與化療藥物順鉑聯(lián)合應(yīng)用的療效，并對和厚樸酚抗腫瘤的機制進行初步的探討。 方法： 1．通過薄膜一超聲分散法制備納米和厚樸

3、酚脂質(zhì)體，檢測和厚樸酚納米脂質(zhì)體的理化特性。 2．通過MTT法分析和厚樸酚脂質(zhì)體在體外對SKOV3腫瘤細胞增殖的影響。在熒光顯微鏡下觀察和厚樸酚脂質(zhì)體誘導(dǎo)細胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變，并用流式細胞術(shù)檢測其對腫瘤細胞凋亡和細胞周期的影響； 3．應(yīng)用BALB/c裸鼠建立SKOV3人卵巢癌皮下瘤模型。用不同劑量的和厚樸酚脂質(zhì)體治療荷瘤裸鼠，觀察療效和篩選有效治療劑量，同時觀察和厚樸酚脂質(zhì)體可能的不良反應(yīng)。 4.應(yīng)用BALB/c

4、裸鼠建立SKOV3人卵巢癌腹腔移植瘤模型。荷瘤小鼠模型隨機分為4個治療組，即：和厚樸酚脂質(zhì)體組；空白脂質(zhì)體組；DDP組與NS對照組，觀察和厚樸酚脂質(zhì)體對裸鼠腹腔瘤生長抑制情況和腹水的生成。 5.分別用和厚樸酚脂質(zhì)體、DDP單藥、和厚樸酚脂質(zhì)體和DDP聯(lián)合治療、NS和空白脂質(zhì)體對照處理荷皮下瘤裸鼠，觀察聯(lián)合治療對裸鼠腫瘤生長的抑制情況和不良反應(yīng)。 6.通過CD31免疫組化檢測腫瘤組織內(nèi)微血管數(shù)量以及通過TUNEL法檢測腫瘤

5、組織細胞凋亡的情況。 結(jié)果： 1.和厚樸酚脂質(zhì)體粒徑大小為130±20nm，包封率為85％。將和厚樸酚脂質(zhì)體用5％葡萄糖液溶解后放入4℃的冰箱中放置1月無沉淀析出。 2.MTT實驗表明和厚樸酚脂質(zhì)體呈時間和劑量依賴的抑制SKOV3細胞的增殖。熒光顯微鏡下，見和厚樸酚脂質(zhì)體組凋亡細胞明顯增加。流式細胞儀檢測和厚樸酚脂質(zhì)體誘導(dǎo)SKOV3腫瘤細胞的凋亡率是35.0±5.5％，和對照組(包括空白脂質(zhì)體和 PBS)相比差異

6、有顯著性(P<0.05) 。 3.體內(nèi)實驗結(jié)果提示20mg/kg和厚樸酚脂質(zhì)體劑量能較好地抑制腫瘤生長，和厚樸酚脂質(zhì)體抑制腫瘤生長與劑量相關(guān)。 4.和厚樸酚脂質(zhì)體能有效的抑制腹腔移植瘤鼠模型腫瘤生長。 5.動物實驗表明和厚樸酚脂質(zhì)體和DDP聯(lián)合治療導(dǎo)致更強的抗腫瘤效應(yīng)，在聯(lián)合治療的28天后，對腫瘤生長的抑制就表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)(協(xié)同指數(shù)：1.48)，并最終導(dǎo)致部分腫瘤消退。而且和厚樸酚脂質(zhì)體和DDP聯(lián)合治療沒有明顯的

7、不良反應(yīng)。 6.免疫組化(CD31染色)證實和厚樸酚脂質(zhì)體治療組的腫瘤組織微血管密度明顯低于DDP處理組(P0.05)。和厚樸酚脂質(zhì)體+DDP聯(lián)合治療對降低腫瘤組織的微血管數(shù)量和增加腫瘤組織凋亡細胞

8、的作用較單獨和厚樸酚脂質(zhì)體或DDP處理更加顯著(P<0.05)，并具有協(xié)同效應(yīng)。 結(jié)論：本研究采用脂質(zhì)體包裹方法明顯改善了和厚樸酚的水溶性。實驗證實了和厚樸酚脂質(zhì)體在體外具有抗腫瘤細胞增殖和誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的作用，發(fā)現(xiàn)和厚樸酚脂質(zhì)體在體內(nèi)抑制荷瘤小鼠腫瘤生長的效果與劑量相關(guān)。證實了和厚樸酚脂質(zhì)體能有效的抑制腹腔移植瘤鼠模型腫瘤的生長，其抗腫瘤機制與誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡和抑制腫瘤新生血管的形成有關(guān)。進一步實驗證實和厚樸酚脂質(zhì)體和DD