超聲介導自制納米泡聯(lián)合順鉑對小鼠H22腫瘤抑制作用的研究.pdf

1、第一部分超聲聯(lián)合自制納米泡對小鼠皮下H22腫瘤抑制作用超聲參數(shù)的探討
　　實驗目的：探討超聲聯(lián)合自制納米泡對小鼠皮下H22腫瘤抑制效果最佳的超聲治療劑量，為今后超聲聯(lián)合微泡介導基因或藥物治療腫瘤奠定理論基礎(chǔ)
　　實驗方法：建立30只昆明鼠皮下H22肝癌細胞移植瘤模型，隨機分為6組。每組予以不同的超聲功率和輻照時間：對照組1（予以假輻照治療），超聲治療組2（1W/cm2+1min）、超聲治療組3（1W/cm2+3min間歇輻照

2、模式，輻照5s，間隔15s，總共3min）、超聲治療組4（1W/cm2+3min，持續(xù)輻照3min），超聲治療組5（2W/cm2+1min）、超聲治療組6（2W/cm2+3min）。其它超聲治療參數(shù)如頻率、占空比等保持一致。麻醉小鼠后固定，每只小鼠尾靜脈注射0.1ml相同濃度的自制納米泡后即刻予以超聲輻照，并在治療前，治療后即刻、治療后24h、治療后72h分別行超聲造影（CEUS）檢查，運用統(tǒng)計學方法比較各組治療前后各時間點的增強強度（

3、VI,Video Intensity）的差異，并在治后24h和72h之后各組分別處死2只小鼠進行腫瘤組織切片的HE染色、免疫組化CD31染色進行微血管密度（MVD）計數(shù)，運用統(tǒng)計學方法比較各組間的差異。
　　實驗結(jié)果：
　?。?）除對照組外，各治療組小鼠腫瘤體積均有減小，但各組間沒有統(tǒng)計學意義，對照組小鼠腫瘤體積最大，表面皮膚和內(nèi)部無壞死組織，但隨著治療功率和治療時間的增加，較大的治療劑量組小鼠腫瘤表面皮膚和內(nèi)部壞死組織增加

4、，并且皮下可見不同程度的出血。
　?。?）CEUS檢查，對照組腫瘤各時刻均可見顯著的超聲顯影，而各腫瘤治療組在超聲破壞后即刻超聲顯影明顯減弱，治療后24h和72h時間點造影圖像雖可見部分腫瘤血流灌注恢復，但是與治療前相比，仍具有明顯的差異。
　?。?）與對照組相比：組2、組3在治療后即刻、24h的VI與組1相比有統(tǒng)計學意義，組4、5、6在治療后即刻、治療后24h、治療后72h的VI與組1相比均有統(tǒng)計學意義。治療功率相同，而治

5、療時間不同的組間比較：組2與組3相比VI在治療后各時刻無統(tǒng)計學意義，說明1W/cm2+1min與1W/cm2+3min間歇輻照組的治療效果無差異；組2與組4相比VI在治療后72h有統(tǒng)計學意義，組5與組6相比VI在治療后24h、72h有統(tǒng)計學意義，說明較大的治療時間組對腫瘤的抑制效果略強于較小的治療時間組。治療時間相同，而治療功率不同的組間比較：組4與組6相比VI在治療后72h有統(tǒng)計學差異，組2與組5相比VI值在治療后72h有統(tǒng)計學差異，

6、說明較大的治療功率對腫瘤的抑制效果略強。
　　（4）病理檢查：HE染色：組1各時間點腫瘤組織結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮細胞排列比較緊密。各治療組在超聲治療后24h、72h細胞破碎，排列疏松，可見少量細胞空泡形成。CD31染色：對照組血管腔完整，充盈良好，微血管密度較大；超聲治療后微血管明顯減少，血管腔閉合，有血管受損的表現(xiàn)，且隨著功率和時間的增加，血管密度明顯減少，細胞破碎增多，可見更多的凋亡細胞。
　?。?）MVD計數(shù)：組2、3治療后

7、24小時MVD值明顯減少，與組1有統(tǒng)計學意義，治療后72h與對照組無統(tǒng)計學意義，組4在治療后24h、72h與組1相比有統(tǒng)計學意義。
　　實驗結(jié)論：
　　（1）超聲治療方法中1W/cm2+1min和1W/cm2+3min間歇輻照方法能夠?qū)δ[瘤的阻斷作用持續(xù)達24h，1/Wcm2+3min、2W/cm2+1min、2W/cm2+3min持續(xù)輻照方法能夠阻斷腫瘤的血供達72h以上。
　　（2）超聲聯(lián)合自制納米泡治療小鼠皮下H

8、22腫瘤較理想的參數(shù)為：超聲聲強1W/cm2，輻照時間為1min或3min間歇輻照模式。
　　第二部分超聲介導自制納米泡聯(lián)合順鉑治療小鼠皮下H22腫瘤療效的初步探討
　　實驗目的：初步探討超聲輻照自制納米泡聯(lián)合化療藥物對小鼠皮下H22肝腫瘤的治療效果，并探討其可能的機制。
　　實驗方法：建立20只小鼠H22肝癌移植瘤模型，隨機分為5組:即空白對照組，單純超聲組（US），超聲微泡組（US+NB），藥物組（順鉑，CDDP）

9、，超聲微泡+藥物組（US+NB+CDDP）,每組4只。對照組不予治療，僅尾靜脈注射生理鹽水0.1ml，單純超聲組只是輻照腫瘤區(qū)域（輸出功率1W/cm2，輻照時間1min），超聲微泡組于尾靜脈注射自制納米泡0.1ml，同時予以超聲輻照，藥物組只給于腹腔注射CDDP0.2ml（按1mg/kg稀釋），超聲微泡+藥物組于腹腔注射CDDP0.2ml后即刻，用超聲探頭輻照腫瘤組織，以上超聲輻照的條件均保持一致（功率1W/cm2,時間1min，占空比

10、20％）。所有鼠均隔一天治療一次，共五次，第9天為最后一次治療，至第11天處死小鼠。開始治療后，觀察腫瘤生長情況，并用超聲儀器測量腫瘤最長徑（a）與其最短徑（b），計算腫瘤體積（V=1/2ab2），繪制生長曲線，至第11天時每組處死兩只小鼠并計算腫瘤質(zhì)量，計算質(zhì)量抑瘤率。取腫瘤組織觀察腫瘤壞死情況，做HE染色和免疫組化法測量微血管密度（MVD）、細胞增殖指數(shù)（KI-67），進行定量分析。
　　實驗結(jié)果：
　?。?）對照組和單

11、純超聲組之間的體積抑瘤率和質(zhì)量抑瘤率無統(tǒng)計學意義，余各治療組與對照組之間的體積抑瘤率和質(zhì)量抑瘤率有統(tǒng)計學意義；超聲微泡組和單純藥物組與超聲微泡藥物組比較，體積抑瘤率和質(zhì)量抑瘤率有統(tǒng)計學意義。
　?。?）除單純超聲組，余各治療組的血管密度（MVD）和腫瘤增殖指數(shù)（KI-67LI）與對照組相比有統(tǒng)計學意義。單純藥物組的腫瘤體積雖有所減小，但血管密度與對照組相比并無統(tǒng)計學意義,而增殖指數(shù)與對照組相比有統(tǒng)計學意義。
　　實驗結(jié)論：超