手霉素聯(lián)合順鉑對卵巢癌裸鼠移植瘤抑制作用的研究.pdf

1、目的：研究手霉素（Manumycin）聯(lián)合順鉑（DDP）對人卵巢癌細胞3AO的體外抑制作用及對裸鼠移植瘤的抑制作用，分析手霉素聯(lián)合順鉑抑制3AO細胞增殖及誘導其凋亡的可能機制，探討手霉素聯(lián)合順鉑應用于卵巢癌的可行性。
　　 方法：
　　 1、以不同濃度的手霉素作用于體外培養(yǎng)的人卵巢癌3AO細胞，用四甲基偶氮唑藍（tetrzolium-based colorimetric assay，MTT）比色試驗檢測細胞的增殖活性，并

2、觀察細胞的形態(tài)學變化。
　　 2、采用MTT比色法檢測手霉素聯(lián)合順鉑對3AO細胞增殖抑制的影響，采用金氏公式[1]分析相互作用指數(shù)（Iteraction Index），評價聯(lián)合后的作用，如q>0.85表示相加作用，q<0.85為拮抗作用。
　　 3、建立3AO細胞裸鼠皮下移植瘤模型，待腫瘤生長至接種后第2周，隨機分為4組，每組5只：分別為對照組、手霉素組、順鉑組、聯(lián)合用藥組。實驗過程中觀察裸鼠的飲食、活動、反應等情況。記

3、錄各組裸鼠皮下移植瘤的生長情況，繪制腫瘤生長曲線，計算腫瘤生長抑制率。
　　 4、免疫組織化學法檢測移植瘤組織Survivin、NF-κB、VEGF、Caspase-3蛋白的表達。
　　 5、流式細胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測移植瘤組織細胞周期和細胞凋亡率的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、MTT比色法顯示手霉素（5、10、20、40、60μmol/L）對3AO細胞增殖具有抑制作用。不同

4、濃度手霉素處理細胞24～72h后，與對照組相比，各處理組OD值均有不同程度下降，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。而且隨手霉素濃度的增大、作用時間的延長，OD值逐漸下降，即手霉素對3AO細胞的增殖抑制作用呈明顯的時間-劑量依賴效應。光鏡下觀察細胞形態(tài)：未經(jīng)藥物作用的細胞呈梭形，形態(tài)飽滿，而用藥組細胞皺縮，破裂，呈不規(guī)則形，脫落細胞增多，抑制了3AO細胞的生長。
　　 2、MTT比色法分析手霉素聯(lián)合順鉑對3AO細胞的增殖抑制作用，

5、結(jié)果顯示：10、20、40μmol/L的手霉素可增強順鉑對3AO細胞的增殖抑制作用，而且隨手霉素濃度的增大，其與順鉑的聯(lián)合作用增強。金氏公式分析相互作用指數(shù)表明不同濃度的順鉑聯(lián)合10、20、40μmol/L的手霉素的q值均>0.85。
　　 3、成功建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型，接種成功率為100％。治療結(jié)束后裸鼠移植瘤體積，各處理組小于對照組，聯(lián)合用藥組小于單藥組，差異均有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。對照組、手霉素組、順鉑組、聯(lián)合

6、用藥組，抑瘤率分別為0.00％、29.85％、37.36％、64.60％。
　　 4、免疫組織化學法檢測3AO細胞裸鼠移植瘤組織Survivin、VEGF、NF-Kb、Caspase-3蛋白的表達：對于每個指標免疫組織化學評分，各處理組和對照組相比，聯(lián)合用藥組和單藥組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　 5、流式細胞術(shù)結(jié)果顯示：對照組、手霉素組、順鉑組、聯(lián)合用藥組，細胞凋亡率逐漸升高，分別為5.24±0.94

7、％、12.16±1.08％、17.41±2.26％、22.93±3.22％，細胞周期G0/G1期細胞逐漸減少，G2/M期細胞逐漸增多，S期細胞變化不明顯。
　　 結(jié)論：
　　 1、手霉素對3AO細胞的增殖抑制作用呈時間-劑量依賴關(guān)系，手霉素與順鉑聯(lián)合應用可增強順鉑對3AO細胞的增殖抑制作用。
　　 2、手霉素可抑制3AO細胞裸鼠移植瘤的生長，手霉素與順鉑聯(lián)合應用抑瘤效果增強。
　　 3、手霉素可使3AO細