免疫抑制性分子sHLA-G、ILT2在NSCLC患者體內(nèi)的表達(dá)及其相關(guān)性的研究.pdf

1、目的:
　　 人類免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子2(Immunoglobulin-like transcript receptor2，ILT2)作為與體內(nèi)重要的免疫抑制分子可溶性人類白細(xì)胞抗原G(Soluble HumanLeukocyte Antigen G sHLA-G)有著結(jié)合力極強(qiáng)的受體，研究其如何發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用可為探討體內(nèi)腫瘤發(fā)病機(jī)制，對(duì)其進(jìn)行早期預(yù)防、早期診斷、早期治療提供新的思路。本研究通過檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌(non-smal

2、l-cell carcinoma，NSCLC)患者外周血血漿免疫抑制性分子sHLA-G水平、PBMC表達(dá)ILT2在各類免疫細(xì)胞上的變化，并探討它們之間的互相關(guān)系，為深入研究非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的免疫逃避作用機(jī)制提供新思路。
　　 方法:
　　 1.NSCLC患者及臨床資料的收集依據(jù)NSCLC診斷均符合國(guó)際肺癌研究協(xié)會(huì)(IASLC)與世界衛(wèi)生組織(WHO)1998年分類標(biāo)準(zhǔn)，選取浙江省臺(tái)州醫(yī)院胸外科2012年3月至

3、2012年9月期間就診41例NSCLC患者及41例健康人群外周血標(biāo)本。采集血液后收集其臨床資料，如年齡、性別、吸煙與否、分化程度、組織學(xué)分型、TNM分期等數(shù)據(jù)結(jié)果。
　　 2.NSCLC患者外周血血漿中sHLA-G表達(dá)水平測(cè)定收集的41例NSCLC患者、41例健康人的新鮮外周血血漿，用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linkedImmunosorbent Assay，ELISA)檢測(cè)血漿中的sHLA-G表達(dá)水平。研究其與其臨床資料

4、，如年齡、性別、吸煙與否、分化程度、組織學(xué)分型、TNM分期等數(shù)據(jù)結(jié)果等的關(guān)聯(lián)性。
　　 3.NSCLC患者PBMC免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子ILT2表達(dá)的檢測(cè)收集41例NSCLC患者、19例肺部良性腫瘤患者、41例健康人的新鮮外周血，EDTA抗凝后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其新鮮外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral bloodmononuclear cells，PBMCs)表面ILT2表達(dá)的百分率及熒光強(qiáng)度(mean relativefluor

5、escence intensity, MRFI)。研究其與其臨床資料，如年齡、性別、吸煙與否、分化程度、組織學(xué)分型、TNM分期等數(shù)據(jù)結(jié)果等的關(guān)聯(lián)性。
　　 4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析用SPSS13.0軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)及合理描述;非正態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用秩和檢驗(yàn)，兩變量相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析;以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.非小細(xì)胞患者外周血

6、血漿中sHLA-G表達(dá)水平測(cè)定NSCLC患者sHLA-G分子表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，且sHLA-G表達(dá)水平與NSCLC患者腫瘤TMN分期顯著相關(guān)，但與其他各臨床因素沒有顯著相關(guān)性，且血漿中sHLA-G與ILT2的表達(dá)水平之間也無(wú)顯著相關(guān)性。
　　 2.非小細(xì)胞肺癌患者PBMC免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子ILT2表達(dá)的檢測(cè) ILT2在各單個(gè)核細(xì)胞上的表達(dá)差異較大。①NSCLC患者組CD14+單核細(xì)胞、CD56+NK細(xì)胞I

7、LT2陽(yáng)性表達(dá)的百分比和平均相對(duì)熒光強(qiáng)度分別與健康對(duì)照組及良性腫瘤組比較，無(wú)顯著差異（P均＞0.05）。②NSCLC患者組CD3+T細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞ILT2陽(yáng)性表達(dá)的百分比和平均相對(duì)熒光強(qiáng)度分別與健康對(duì)照組及良性腫瘤組比較均明顯下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。③肺部良性腫瘤組PBMC各種免疫細(xì)胞ILT2陽(yáng)性表達(dá)的百分比和平均相對(duì)熒光強(qiáng)度與健康對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。④將41例NSCLC患者按年齡、

8、性別、吸煙與否、分化程度、組織學(xué)分型、TNM分期進(jìn)行分類比較發(fā)現(xiàn)，患者PBMC上ILT2的表達(dá)在年齡、性別、吸煙與否、分化程度及TNM分期上的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。⑤在組織學(xué)分型中肺腺癌患者CD3+T細(xì)胞ILT2陽(yáng)性表達(dá)的百分比低于肺鱗癌(P＜0.05)，及肺腺癌患者CD19+B細(xì)胞上表達(dá)ILT2平均相對(duì)熒光強(qiáng)度也低于肺鱗癌(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 NSCLC患者CD3+T細(xì)胞和CD19+B

9、細(xì)胞ILT2陽(yáng)性表達(dá)的百分比和平均相對(duì)熒光強(qiáng)度異常下降，且與組織學(xué)分型相關(guān);并且NSCLC患者外周血血漿sHLA-G異常升高，提示了NSCLC患者體內(nèi)激活或抑制信號(hào)間的不平衡，而激活或抑制信號(hào)間的相互平衡才能維持體內(nèi)正常免疫應(yīng)答，說明免疫抑制分子HLA-G、ITL2可能參與非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的免疫逃避反應(yīng)。ILT2作為與體內(nèi)重要的免疫抑制分子，與HLA-G有著結(jié)合力極強(qiáng)的受體，研究它們的表達(dá)與NSCLC患者組織學(xué)分型等臨床資料