低頻超聲聯(lián)合微泡介導(dǎo)pEGFP-N1基因轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分低頻超聲不同功率超聲輻照對前列腺癌細(xì)胞膜通透性的體外實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：探討低頻超聲不同功率超聲輻照對前列腺癌細(xì)胞膜通透性的影響。
　　 方法：應(yīng)用低頻超聲治療儀（頻率21KHz）輻照前列腺癌PC-3 細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、超聲組（根據(jù)聲功率不同分為5 組，分別為6.6mW、26.6mW、61.1mW、104mW、184mW組）。超聲組在超聲輻照場中輻照5min，占空比20％。輻照后應(yīng)用熒光顯微鏡觀察F

2、D500 進(jìn)入細(xì)胞的情況，并檢測FD500 染色陽性率，應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞死亡率。
　　 結(jié)果：1.細(xì)胞FD500染色陽性率結(jié)果：超聲輻照組中在聲功率達(dá)到61.1mW 之前，隨聲功率的增加細(xì)胞FD500 染色陽性率逐漸增加，聲功率達(dá)到61.1mW 之后細(xì)胞FD500染色陽性率未見明顯改變2. 臺(tái)盼藍(lán)染色檢測的細(xì)胞死亡率：隨著聲功率增加細(xì)胞死亡率也逐漸增加。結(jié)論：低頻超聲不同聲功率輻照能對前列腺癌細(xì)胞膜產(chǎn)生通透性。但不同聲功率

3、產(chǎn)生細(xì)胞膜的通透性不同。
　　 第二部分低頻超聲聯(lián)合微泡介導(dǎo)pEGFP-N1基因轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：探討低頻超聲聯(lián)合微泡介導(dǎo)pEGFP-N1基因轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞的可行性，并觀察聯(lián)合脂質(zhì)體對基因轉(zhuǎn)染的影響。
　　 方法：應(yīng)用超聲治療儀（頻率21KHz）輻照前列腺癌PC-3 細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、超聲組、微泡組、微泡+超聲組、脂質(zhì)體組、脂質(zhì)體+超聲組、超聲+微泡+脂質(zhì)體組，其中超聲+微泡+

4、脂質(zhì)體組根據(jù)微泡體積濃度不同分為6 個(gè)亞組，分別為0％組、10％組、20％組、30％組、40％組、50％組。超聲處理均為將不同成分細(xì)胞懸液在超聲輻照場中輻照5min，占空比20％，聲功率61.1mW。超聲輻照完畢后立即將細(xì)胞懸液（最后留100μl 細(xì)胞重懸液用臺(tái)肦藍(lán)染色檢測細(xì)胞死亡率）轉(zhuǎn)移到12 孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)4h，換液后繼續(xù)培養(yǎng)48h 應(yīng)用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染情況，以檢測基因轉(zhuǎn)染的百分率。
　　 結(jié)果：在不同組別的基因轉(zhuǎn)

5、染中除對照組與微泡組比較差異無顯著性意義外，其余各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；其中超聲+微泡+脂質(zhì)體組轉(zhuǎn)染率最高，其次為脂質(zhì)體+超聲組。在超聲+微泡+脂質(zhì)體亞組中，在微泡濃度增加到20％之前，基因轉(zhuǎn)染率隨著微泡濃度增加而增加，微泡濃度到20％之后，隨著微泡濃度的增加基因轉(zhuǎn)染率反而下降，而細(xì)胞死亡率一直隨微泡濃度的增加而增加。
　　 結(jié)論：低頻超聲聯(lián)合微泡介導(dǎo)pEGFP-N1 基因在前列腺癌細(xì)胞中能有效轉(zhuǎn)染。超