MicroRNA-877在腎癌中的表達(dá)及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:腎細(xì)胞癌(RCC)，又稱(chēng)為腎癌，是一種比較常見(jiàn)的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，生存率比較低，對(duì)放療和化療的治療不敏感，并且極度缺乏臨床早期診斷的腫瘤標(biāo)記物，且有關(guān)腎癌的的發(fā)病機(jī)制并不多，而且機(jī)制并不明確。微小RNA(microRNA，miRNA，miR)在人類(lèi)腫瘤中差異性表達(dá)，具有很穩(wěn)定的特性，為腫瘤的診斷和治療提供新的切入點(diǎn)。
　　MicroRNA-877(miR-877)在人類(lèi)多種腫瘤中差異性表達(dá)，然而尚沒(méi)有關(guān)于miR-877在腎癌

2、中的表達(dá)及作用的研究。本研究旨在檢測(cè)miR-877在腎癌患者血液和組織中的表達(dá)，并探究miR-877在腎癌細(xì)胞中的作用。
　　方法:利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)miR-877在腎癌患者血液、組織及細(xì)胞中的表達(dá)的表達(dá)水平;采用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-877的靶基因;利用雙熒光素酶報(bào)告基因方法驗(yàn)證miR-877與靶基因的結(jié)合;利用miR-877模擬物轉(zhuǎn)染腎癌細(xì)胞ACHN、Caki-2、769-p和786-O上調(diào)miR-877后，通過(guò)MT

3、T、劃痕、信號(hào)通路關(guān)鍵分子來(lái)探究其在腎癌細(xì)胞中的作用;采用免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-877的靶蛋白在腎癌組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果:與健康人對(duì)照組相比，腎癌患者血液中的miR-877表達(dá)水平下降;腎癌患者癌組織相對(duì)與癌旁組織miR-877表達(dá)水平下降; miR-877在腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN、769-p及Caki-2低表達(dá);體外功能學(xué)實(shí)驗(yàn)表明上調(diào)miR-877可顯著抑制腎癌細(xì)胞系769-p、ACHN、Caki-2的增殖和遷移;生物信息學(xué)方

4、法預(yù)測(cè)eEF2K是miR-877的靶基因，雙熒光素酶報(bào)告基因方法證實(shí)miR-877與eEF2K直接結(jié)合，上調(diào)miR-877可下調(diào)Akt的磷酸化水平及下調(diào)CyclinD1的表達(dá);與其配對(duì)的癌旁組織比較發(fā)現(xiàn)，在腎癌組織中eE2F2K的表達(dá)較高。
　　結(jié)論:研究顯示在腎癌患者血液、組織以及腎癌細(xì)胞系中miR-877明顯低表達(dá)，miR-877的靶基因是eE2F2K，miR-877在腎癌中具有一定的抑癌作用。上述發(fā)現(xiàn)表明miR-877具有作