XIAP在腎癌中的表達(dá)及其與腎癌化療耐藥的關(guān)系.pdf

1、腎癌是泌尿系比較常見的惡性腫瘤，僅次于膀胱癌位于第二位，約占成人腫瘤的2％～3％，并且有研究表明其發(fā)病率和死亡率均有進(jìn)一步上升的趨勢(shì)。除了依賴于早期手術(shù)切除外，腎癌對(duì)放療、化療及內(nèi)分泌等治療均不敏感，治療效果較差，手術(shù)后的放療、化療并不能減少轉(zhuǎn)移率，免疫治療也只對(duì)15～20％的患者有效。然而有將近50％的腎癌患者首次就診時(shí)已屬晚期，失去了最佳的手術(shù)時(shí)機(jī)，并且有約40％的患者術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，未接受治療的患者3年存活率低于5％。因此尋找

2、腎癌發(fā)生、發(fā)展的原因并進(jìn)行有針對(duì)性的治療一直是學(xué)者們研究的目標(biāo)。 雖然目前腎癌的發(fā)病機(jī)理并不十分明確，但大量的研究結(jié)果表明，細(xì)胞凋亡機(jī)制的缺陷在其發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用，腫瘤細(xì)胞的凋亡受到抑制是腎癌發(fā)生的重要機(jī)制?；熓菒盒阅[瘤綜合治療的一種重要方法，然而腎癌是典型的耐藥標(biāo)本，對(duì)大多數(shù)化療藥物耐藥，因而腎癌發(fā)生耐藥的機(jī)制成為亟需解決的問題。同樣有研究發(fā)現(xiàn)，腎癌發(fā)生耐藥的原因除了P糖蛋白、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶等蛋白的異常表達(dá)外，凋亡

3、作用受到抑制也可能是腎癌對(duì)化療藥物不敏感甚至失敗的重要原因。 凋亡抑制蛋白(IAP)是一類在結(jié)構(gòu)上具有同源性的細(xì)胞內(nèi)源性凋亡抑制蛋白家族，XIAP是近來發(fā)現(xiàn)的IAP家族中的一員，具有強(qiáng)列的凋亡抑制作用，它能通過有效地抑制天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(caspase)等凋亡途徑抑制細(xì)胞凋亡。研究表明，XIAP在多種腫瘤如卵巢癌、白血病、前列腺癌等疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用，并且與這些腫瘤的化療耐藥密切相關(guān)。而通過反義核酸技術(shù)

4、設(shè)計(jì)出與目的基因序列互補(bǔ)的寡核苷酸序列能夠封閉該基因的表達(dá)，因而為腫瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)和治療提供了新的方法和途徑。目前關(guān)于XIAP在腎癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其與腎癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系研究極少，而XIAP對(duì)腎癌化療敏感性的影響則未見研究報(bào)道。因此，研究XIAP在腎癌組織中的表達(dá)情況及其對(duì)腎癌化療敏感性的影響、研究XIAP反義寡核苷酸對(duì)腎癌化療敏感性的作用，對(duì)于闡述腎癌的發(fā)病及化療耐藥機(jī)制，探討提高腎癌化療敏感性的方法，進(jìn)而促進(jìn)腎癌的治療療效，都具有

5、重要的意義。 第一部分 XIAP和Caspase-3在腎癌中的表達(dá)及意義。 目的：研究XIAP、caspase-3在腎癌組織中的表達(dá)情況，探討XIAP、caspase-3與腎癌臨床病理特征之間的關(guān)系。 方法：采用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)XIAP、caspase-3蛋白在50例腎癌組織及15例遠(yuǎn)離腎癌的正常腎組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果：(1)免疫組化方法檢測(cè)顯示XIAP在腎癌標(biāo)本中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常腎

6、組織中的陽性表達(dá)率，而caspase-3在腎癌組織中陽性表達(dá)明顯低于癌旁正常腎組織中的陽性表達(dá)率。經(jīng)比較，XIAP、caspase-3在腎癌中的表達(dá)均與癌旁正常腎組織中的表達(dá)有非常顯著性差異(p<0.01)。(2)在不同年齡、性別及不同組織學(xué)類型的腎癌組織中，XIAP和caspase-3的陽性表達(dá)均無顯著性差異(p>0.05)。在不同病理分級(jí)、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎癌組織中，XIAP的陽性表達(dá)均有顯著性差異。組織分化程度越低，XI

7、AP的陽性表達(dá)率越高(p<0.05)；臨床分期越高，XIAP的陽性表達(dá)率也越高(p<0.05)；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎癌組織，其XIAP的表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎癌組織(p<0.01)。caspase-3的表達(dá)程度與腎癌的病理分級(jí)有關(guān)，在不同的病理分級(jí)之間其表達(dá)有顯著性差異(p<0.05)，組織分化程度越高，caspase-3的陽性表達(dá)越高；而在不同臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間，caspase-3的表達(dá)無顯著差異(p>0.05)。

8、 結(jié)論：(1)XIAP在腎癌組織中的表達(dá)明顯上調(diào)，而caspase-3的表達(dá)則相應(yīng)地下調(diào)。(2)XIAP的陽性表達(dá)與腎癌的組織學(xué)病理分級(jí)、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與患者的年齡、性別及腎癌的組織學(xué)類型無關(guān)。caspase-3的陽性表達(dá)與腎癌的病理分級(jí)相關(guān)，與患者的年齡、性別及腎癌的組織學(xué)類型、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。(3)XIAP在腎癌組織中的陽性表達(dá)與caspase-3的陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，兩者表達(dá)的改變可能在腎癌的發(fā)生

9、、發(fā)展中起重要作用。 第二部分 XIAP對(duì)腎癌786-0細(xì)胞化療敏感性的影響。 目的：研究XIAP在腎癌耐藥發(fā)生中的作用及XIAP反義寡核苷酸對(duì)腎癌化療的增敏作用，探討腎癌耐藥的發(fā)生機(jī)制并為逆轉(zhuǎn)腎癌耐藥探索新的方法和途徑。 方法：將不同濃度的化療藥物順鉑作用于腎癌786-0細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR、western blot、流式細(xì)胞技術(shù)等方法觀察XIAP mRNA和蛋白表達(dá)的變化及細(xì)胞凋亡率的改變；然后將腎癌786

10、-0細(xì)胞轉(zhuǎn)染XIAP反義寡核苷酸，應(yīng)用RT-PCR、Western blot、流式細(xì)胞及電鏡技術(shù)、MTT等方法，檢測(cè)XIAP mRNA和蛋白表達(dá)的變化及caspase-3活性的改變，觀察化療藥物順鉑對(duì)786-0細(xì)胞生長抑制和誘導(dǎo)凋亡作用的改變。 結(jié)果：(1)10umol/L及以下濃度的化療藥物順鉑不能有效地通過下調(diào)XIAP mRNA和蛋白表達(dá)而誘導(dǎo)腎癌786-0細(xì)胞的凋亡(p>0.05)，高于10umol/L濃度的化療藥物順鉑能

11、下調(diào)XIAP mRNA和蛋白表達(dá)，但細(xì)胞凋亡率并不增加(p>0.05)。(2)將XIAP反義寡核苷酸成功轉(zhuǎn)入腎癌786-0細(xì)胞后，在10umol/L順鉑的作用下，XIAP mRNA和蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)，細(xì)胞生長受到抑制，并且caspase-3活性增加，細(xì)胞凋亡率明顯增加，對(duì)順鉑的半效抑制濃度IC<,50>也顯著降低。與單用順鉑或XIAP反義寡核苷酸比較均有顯著性差異(p<0.05或0.01)。 結(jié)論：(1)XIAP參與了腎癌耐藥