1-磷酸鞘氨醇對(duì)人耐受型樹突狀細(xì)胞功能影響的初步研究.pdf

1、本文基于對(duì)人外周血單核細(xì)胞來源的耐受型樹突狀細(xì)胞(tolerogenicdendritic cells，tDC)的免疫耐受功能和1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate，S1P)的生理作用進(jìn)行研究，首次闡述了S1P在體外對(duì)人tDC免疫學(xué)功能的影響。
　　 未成熟樹突狀細(xì)胞(immature dendritic cells，iDC)可作為一種發(fā)揮免疫耐受功能的DC在移植物抗宿主病中發(fā)揮重要作用。但是越來越多的

2、研究者發(fā)現(xiàn)，tDC在移植物排斥和多種自身免疫性疾病中能更好地發(fā)揮耐受功能。本實(shí)驗(yàn)用流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR的方法分別檢測(cè)tDC CD209、HLA-DR、CD80、CD83、CD86幾種表型分子的表達(dá)以及細(xì)胞內(nèi)IL-10、TGF-β、Fas-L、IDO、IL-12p40以及TNF-amRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示該tDC高表達(dá)HLA-DR、DC標(biāo)志CD209、以及發(fā)揮免疫抑制功能的IL-10、TGF-B、Fas-L、IDO的mRNA，低表達(dá)成

3、熟標(biāo)志CD83和共刺激分子CD80、CD86以及兩種炎性細(xì)胞因子IL-12p40和TNF-a mRNA。在表型上屬于一種未成熟DC。
　　 目前鑒于對(duì)S1P影響免疫系統(tǒng)功能研究的逐步深入，S1P對(duì)免疫系統(tǒng)中重要的細(xì)胞亞群tDC的影響引起了我們的興趣。本實(shí)驗(yàn)用RT-PCR檢測(cè)的方法證明tDC表達(dá)S1P受體1，2，5，不表達(dá)受體3和4且S1P受體1和受體2 mRNA的表達(dá)均明顯高于S1P受體5。流式方法檢測(cè)出10-5M的S1P會(huì)引起

4、tDC細(xì)胞內(nèi)明顯的Ca2+流的增加。Ca2+的變化提示我們S1P確實(shí)能與tDC表面的受體結(jié)合導(dǎo)致tDC的活化。S1P作用于tDC后，其表型和炎性細(xì)胞因子IL-12p40和TNF-a mRNA的表達(dá)無明顯變化，仍處于未成熟狀態(tài)，卻上調(diào)了發(fā)揮免疫抑制功能的IL-10、TGF-β和Fas-LmRNA的表達(dá)。因此進(jìn)一步用Western Blot方法證明了S1P會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信號(hào)蛋白ERK磷酸化水平發(fā)生變化：S1P在一定濃度范圍內(nèi)增強(qiáng)ERK磷酸化水