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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
探討氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,OxLDL)對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)功能的影響,為動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)的防治提供了提供新思路及理論基礎(chǔ)。
方法:
1.采用免疫磁珠分選技術(shù)和流式細(xì)胞儀分選技術(shù),分選C57BL/6(H-2Kb)小鼠脾臟、動(dòng)脈壁CD11c+IA/IE+DC和MHCⅡ類(lèi)分子
2、限制的OVA323-339抗原肽特異的TCR轉(zhuǎn)基因小鼠OT-Ⅱ小鼠(H-2Kb)的初始CD4+CD62L+T細(xì)胞。
2.采用 Real-time PCR技術(shù),檢測(cè) DC CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、血紅素氧合酶1(Heme oxygenase-1,HMOX-1
3、)、Toll受體(Toll-like receptors,TLR)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、CD36和CD86基因的表達(dá)。
3.采用 DC與抗原肽特異性初始 CD4+CD62L+T細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)和流式細(xì)胞儀技術(shù),檢測(cè)CD4+T細(xì)胞胞內(nèi)IFN-γ和IL-17的產(chǎn)生,分析DC對(duì)T細(xì)胞分化的調(diào)控作用。
結(jié)果:
1. OxLDL促進(jìn)小鼠脾臟
4、DC、動(dòng)脈壁DC CHOP和Caspase-3基因的表達(dá),觀察到 DC CHOP和Caspase-3基因的表達(dá)能被活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)的抑制劑N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine,NAC)所抑制。
2.OxLDL促進(jìn)小鼠脾臟 DC、動(dòng)脈壁 DC HMOX-1基因的表達(dá),且可以被ROS抑制劑NAC所抑制。
3. OxLDL能夠誘導(dǎo)小鼠脾臟DC高表達(dá)CD36、C
5、D86和eNOS基因,OxLDL也能促進(jìn)DC表達(dá)TLR4,但不影響TLR2、TLR6、TLR7和TLR9的表達(dá)。
4.在DC與抗原肽特異性初始CD4+CD62L+T細(xì)胞共培養(yǎng)體系中,OxLDL能夠促進(jìn)小鼠脾臟DC誘導(dǎo)初始CD4+CD62L+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化。
結(jié)論:
1. OxLDL通過(guò)ROS依賴(lài)的途徑促進(jìn)DC CHOP和Caspase-3基因的表達(dá),同時(shí)OxLDL也可通過(guò)ROS依賴(lài)的途徑促進(jìn)DC
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