輸尿管完全梗阻大鼠腎臟差異蛋白質(zhì)的篩選.pdf

1、目的：
　　 輸尿管梗阻所致的腎積水是小兒泌尿外科常見的先天畸形,胎兒腎積水的發(fā)病率為0.1.2％,其中66％-75％的胎兒腎積水出生后仍有腎積水存在。因此,按我國(guó)每年有2000萬(wàn)個(gè)嬰兒出生計(jì)算,每年至少有約2萬(wàn)名先天性腎積水患兒出生。盡管每年有大量關(guān)于先天性腎積水基礎(chǔ)和臨床研究的文獻(xiàn)報(bào)道,但是,目前對(duì)于先天性腎積水仍然有許多亟待解決的問題。梗阻性腎病是嬰兒和兒童。腎臟衰竭最常見的原因,兒童梗阻性腎病占所有兒童終末期腎臟疾病(e

2、nd-stage renal diseaseESRD)的0.3％,占所有兒童。腎移植的16.1％。對(duì)兒童梗阻性腎病的治療尚局限于手術(shù)解除梗阻,一些學(xué)者對(duì)后尿道瓣膜患兒遠(yuǎn)期療效的觀察提示許多患兒解除梗阻后遠(yuǎn)期仍存在高血壓、腎功能衰竭等嚴(yán)重問題,對(duì)輸尿管梗阻的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究也表明即使梗阻解除后仍存在遠(yuǎn)期持續(xù)的腎臟損傷,最終發(fā)展為腎臟纖維化。因此,對(duì)于新生兒腎積水以及梗阻性腎病,目前急需研究腎臟發(fā)生不可逆損傷的機(jī)制,尋求減輕或逆轉(zhuǎn)腎臟損害的方法

3、,將使梗阻性腎病以及其他慢性腎臟疾病的治療有新的突破。近幾年來(lái),蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在腎臟病領(lǐng)域廣為應(yīng)用,對(duì)于幫助我們進(jìn)一步的了解人體腎臟生理功能、加深對(duì)腎臟疾病的認(rèn)識(shí)、發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)記物、識(shí)別新治療靶和新藥研發(fā)等均具有深遠(yuǎn)意義。腎臟病蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要包括腎組織不同的結(jié)構(gòu)(腎小球、血管、腎小管、腎間質(zhì)足突細(xì)胞)蛋白質(zhì)組學(xué)。尿液蛋白質(zhì)組學(xué),腎臟替代治療時(shí)透析液或超濾液的蛋白質(zhì)組學(xué)等。本試驗(yàn)通過常用的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),雙向電泳,質(zhì)譜分析等技術(shù),篩

4、查輸尿完全梗阻后腎臟損傷的特異蛋白質(zhì),研究腎臟損害的發(fā)生機(jī)制,為進(jìn)一步減輕腎臟損害,保存腎臟功能奠定基礎(chǔ)。
　　 材料及方法：
　　 將2月齡SD(Sprague-dawley rat)大鼠隨機(jī)分成UUO12h、UUO24h、UUO72h和對(duì)照組(sham),共4組,每組各6只,取腎臟組織,應(yīng)用雙向電泳技術(shù)及蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析技術(shù),尋找輸尿管梗阻動(dòng)物模型腎臟組織在不同的梗阻時(shí)段的差異蛋白質(zhì)。用RT-PCR對(duì)鑒定的差異蛋白進(jìn)行

5、驗(yàn)證。用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間比較采用t檢驗(yàn),p＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、輸尿管梗阻后12小時(shí)組與正常組相比,共有248個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào),145個(gè)蛋白點(diǎn)上調(diào),共找出19個(gè)差異蛋白點(diǎn)。經(jīng)過圖像及統(tǒng)計(jì)分析,有6個(gè)可送質(zhì)譜鑒定,其中搜索出兩種蛋白,一是磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白l,一是線粒體ATP合酶亞基D,此兩種蛋白都上調(diào)1倍以上。
　　 2、輸尿管梗阻

6、后24小時(shí)組與正常組相比,共有233個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào),157個(gè)蛋白點(diǎn)上調(diào),共找出16個(gè)差異蛋白點(diǎn),經(jīng)過圖像及統(tǒng)計(jì)分析,有5個(gè)可送質(zhì)譜鑒定。
　　 3、輸尿管梗阻后72小時(shí)組與正常組相比,共有238個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào),36個(gè)蛋白點(diǎn)上調(diào),共找出25個(gè)差異蛋白,經(jīng)過圖像及統(tǒng)計(jì)分析,有15個(gè)可送質(zhì)譜鑒定。
　　 4、RT-PCR結(jié)果提示在正常對(duì)照組和輸尿管梗阻后12小時(shí)組,磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白1和線粒體ATP合酶亞基D均有表達(dá),并且在輸尿