β-NGF在新骨形成過程中的可能調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：
　　神經(jīng)生長因子能夠促進(jìn)骨的形成與改建。眾多研究表明β‐NGF在骨代謝各個(gè)過程具有重要的調(diào)控作用。本課題通過建立大鼠顱骨標(biāo)準(zhǔn)骨缺損局部早期持續(xù)灌注β‐NGF給藥模型，研究β‐NGF對(duì)骨缺損區(qū)域新骨形成和改建的影響，以及在此過程中β‐NGF對(duì)骨缺損區(qū)新骨形成的可能調(diào)節(jié)作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、利用外科手術(shù)方法切取SD大鼠顱骨頂部左右兩側(cè)的骨質(zhì)，建立配對(duì)大鼠顱骨標(biāo)準(zhǔn)骨缺損，并建立局部持續(xù)灌注β‐NGF給藥模型

2、。通過HE染色和Gomori改良三色染色，觀察兩側(cè)顱骨缺損的愈合情況，檢測(cè)建模是否成功。2、建模成功后，往實(shí)驗(yàn)側(cè)顱骨缺損區(qū)填充骨粉作為支架后灌注β‐NGF，建立觀察模型。3、通過HE染色、Gomori改良三色染色，檢測(cè)術(shù)后3、7、14、21和28天5個(gè)時(shí)間點(diǎn)骨缺損區(qū)的新生骨量，探討β-NGF對(duì)骨缺損區(qū)新骨形成和改建的影響。4、分別利用免疫組化技術(shù)及特殊染色技術(shù)（TRAP染色）檢測(cè)骨缺損區(qū)組織中 BMP‐2的表達(dá)水平和 BMP‐2積分光密

3、度值（IOD），檢測(cè)骨缺損區(qū)組織中抗酒石酸堿性磷酸酶的表達(dá)水平及其積分光密度值（IOD），研究 BMP‐2及破骨細(xì)胞活性在β-NGF調(diào)節(jié)新骨形成和改建過程中的可能作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.HE及Gomori改良三色染色結(jié)果顯示β‐NGF灌注側(cè)（實(shí)驗(yàn)組）與空白灌注側(cè)（對(duì)照組）皆有新骨的形成，實(shí)驗(yàn)組的新骨形成量比對(duì)照組量大，在28天組實(shí)驗(yàn)組可見明顯的新骨生成，且可見到骨缺損區(qū)已被新骨充填，而對(duì)照組28天可見骨缺損區(qū)新骨的形

4、成及膜性成骨，說明早期灌注模型不會(huì)對(duì)新骨形成造成阻礙，建模成功。2.Gomori改良三色染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，顱骨實(shí)驗(yàn)組骨缺損區(qū)新骨形成在第14，21，28天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上明顯高于對(duì)照組（P<0.05），余時(shí)間點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.免疫組化結(jié)果表明，BMP-2表達(dá)水平方面，實(shí)驗(yàn)組在第14天時(shí)IOD值明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），余時(shí)間點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。特殊染色TRAP染色結(jié)果表明，骨吸收的活性，實(shí)驗(yàn)組在第7，21，28天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上明顯低于