姜黃素聯(lián)合氟尿嘧啶對人肝癌HepG2細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的:肝癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴重影響人類的生活健康。氟尿嘧啶(FU)是一類臨床廣泛應用的抗代謝腫瘤藥物，阻斷腫瘤細胞內的RNA和DNA合成，達到抑制腫瘤生長的作用。然而高劑量時毒副作用大以及對肝癌的療效不足等在一定程度上限制了其臨床使用。姜黃素(CU)是一類從傳統(tǒng)中藥姜黃等植物提取的酚類化合物。近年研究表明，姜黃素能通過促進腫瘤細胞凋亡以及阻滯細胞周期等機制發(fā)揮明顯抑制腫瘤生長的功效。其對機體正常細胞無明顯毒

2、性作用使其成為當下的研究熱點。本研究擬從體外角度，觀察姜黃素聯(lián)合氟尿嘧啶對人肝癌HepG2細胞生長的協(xié)同抑制作用。通過CCK-8法檢測細胞活力，雙染流式細胞術檢測細胞凋亡情況，進一步利用Western Blot技術檢測凋亡通路蛋白active Caspase-3和細胞存活通路蛋白Bcl-2的表達情況。
　　方法:將對數(shù)生長期的人肝癌HepG2細胞隨機分為CU單用組、FU單用組、CU+FU聯(lián)用組、陰性對照組，藥物作用時間72h，通過

3、CCK-8法測算藥物對各組細胞活力的抑制作用;AnnexinⅤ/PI雙染流式細胞術檢測各組細胞凋亡率;用Western Blot技術檢測凋亡通路蛋白active Caspase-3和細胞存活通路蛋白Bcl-2的表達情況。
　　結果:CCK-8檢測結果顯示，不同濃度CU(3.125、6.25、12.5、25、37.5、50、100μM)單獨作用人肝癌HepG2細胞72h后，其對應的細胞抑制率分別為20.59±2.88％、33.53±

4、4.63％、49.63±3.37％、64.05±3.62％、66.83±4.16％、73.08±5.29％、80.40±2.23％,不同濃度FU(3.125、6.25、12.5、25、37.5、50、100μM)單獨作用人肝癌HepG2細胞72h后，其對應的細胞抑制率分別為25.66±3.85％、42.15±3.58％、58.05±5.06％、65.92±4.42％、72.89±5.04％、77.14±3.93％、82.39±4.90％

5、，不同比例濃度CU與FU聯(lián)合作用人肝癌HepG2細胞72h，F(xiàn)U∶CU=1∶2時，F(xiàn)U+CU(3.125+6.25、6.25+12.5、12.5+25、25+50、50+100μM)作用后的抑制率為36.66±3.85％、63.15±2.58％、76.05±2.06％、82.92±3.41％、95.89±5.03％(P＜0.05), FU∶CU=2∶1時，F(xiàn)U+CU(6.25+3.125、12.5+6.25、25+12.5、50+25、

6、100+50μM)作用后的抑制率為30.58±2.87％、57.52±2.63％、72.62±1.36％、79.04±1.61％、93.82±2.16％(P＜0.05)，由此可計算出中效濃度IC50。單用CU(IC50:15.32±2.60μM)或FU(IC50:11.03±1.86μM)細胞活力明顯抑制，CU與FU聯(lián)合用藥可進一步顯著抑制細胞活力，表現(xiàn)為聯(lián)合用藥后CU的IC50降為10.86±0.61μM(CU∶FU=2∶1)和11.

7、53±1.73μM(CU∶FU=1∶2)(P＜0.05),FU為4.18±0.89μM(CU∶FU=2∶1)和8.28±1.89μM(P＜0.05)。上述4組對細胞活力抑制均呈現(xiàn)明顯的劑量遞增趨勢。雙染流式結果顯示，單用CU(25μM)、單用FU(12.5μM)以及CU(25μM)+FU(12.5μM)聯(lián)合用藥組的細胞凋亡率分別為7.08％，16.36％和20.43％。Western Blot結果進一步顯示，與單藥組相比，聯(lián)合用藥顯著上