益腎骨康方對裸鼠溶骨性骨轉移瘤的干預作用機制研究.pdf

1、晚期惡性腫瘤比較容易轉移于骨組織，疼痛是其主要癥狀，如果不及時治療會發(fā)展至骨骼功能障礙、病理性骨折、骨髓功能抑制、高鈣血癥及癱瘓等因脊髓神經(jīng)受壓引起的嚴重并發(fā)癥。治療肺癌骨轉移瘤主要是為減癥治療，其目的主要是維持患者一般生活工作，防止骨折，控制疼痛，改善生活質量，延長預期生存期。西藥治療有一定的毒副作用及成癮性，因此中醫(yī)中藥以副作用小、療效顯著的特點在骨轉移癌的治療方面發(fā)揮重要的作用。
　　本研究分4部分:
　　一、左心室注

2、射法裸鼠肺腺癌溶骨性骨轉移癌模型的建立；
　　二、益腎骨康方對溶骨性骨轉移瘤血清堿性磷酸酶的影響作用；
　　三、蛋白質印跡法檢測扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方對溶骨性骨轉移裸鼠基質來源趨化因子蛋白表達的調控作用；
　　四、蛋白質印跡法檢測扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方對溶骨性骨轉移裸鼠趨化因子受體蛋白表達的調控作用。
　　一、左心室注射法裸鼠肺腺癌溶骨性骨轉移癌模型的建立
　　目的：本實驗利用左心室注射法注射獲得專

3、利的人肺腺癌溶骨性骨轉移細胞系CPA-YANG1BM，以建立溶骨性骨轉移模型，并以此模型為基礎，觀測中藥對其的干預作用。
　　方法：本實驗研究使用了獲得專利的人肺腺癌溶骨性骨轉移細胞系CPA-YANG1BM，由上海交通大學附屬胸科醫(yī)院楊順芳教授進行指導，使用左心室注射法建立裸鼠肺腺癌溶骨性骨轉移模型。將裸鼠隨機分為6組，每組6只，并于造模后第3天起給予藥物干預。5周后經(jīng)過micro SPECT/CT顯像和病理切片統(tǒng)計各組裸鼠骨轉移

4、數(shù)，計算各組骨轉移率及病理組織切片上腫瘤細胞數(shù)量與細胞總數(shù)的百分比。
　　結果：
　　1.帕米磷酸二鈉組發(fā)現(xiàn)1個骨轉移部位，其骨轉移率為17％;益腎骨康方高劑量組發(fā)現(xiàn)4個骨轉移部位，其骨轉移率為50％;益腎骨康方中劑量組發(fā)現(xiàn)2個骨轉移部位，其骨轉移率為33％;而模型對照組出現(xiàn)了12個骨轉移部位，其達到了百分之百的骨轉移率;益腎骨康方低劑量組與中西藥組沒有發(fā)現(xiàn)骨轉移部位，其骨轉移率為零。
　　2.正常裸鼠骨皮質及骨小梁發(fā)

5、育良好，正常的骨髓細胞充滿髓內腔;模型對照組裸鼠可見腫瘤細胞幾乎完全填充整個骨髓腔，骨小梁破壞極其明顯，不見骨小梁結構，顯微鏡下可見多個實性癌細胞團及多個多核巨細胞（破骨樣細胞）;可見皮質受損嚴重，呈大片缺損狀，骨皮質明顯變薄，而癌細胞在髓腔邊緣呈活躍狀態(tài)，骨小梁被損壞，癌細胞明顯向外發(fā)展。低劑量益腎骨康方組及西藥帕米膦酸二鈉組裸鼠骨髓腔內少見多核巨細胞，髓腔內腫瘤細胞不見，未見骨皮質受損及骨小梁破壞;益腎骨康方高劑量組及中劑量組可見骨

6、皮質、骨小梁受損程度比模型對照組明顯減輕，髓腔內可見少量腫瘤細胞;可見中西藥組裸鼠骨皮質受損，但仍較完整，髓腔內可見腫瘤細胞，骨皮質破壞及骨小梁受損在一定程度范圍內。
　　結論：
　　1.成功培育人肺腺癌骨轉移細胞株CPA-YANG1BM;
　　2.根據(jù)micro-Spect/CT顯像結果顯示，模型對照組均出現(xiàn)多個部位的骨轉移，證實溶骨性骨轉移造模成功;
　　3.根據(jù)病理組織切片結果顯示，骨轉移灶均為肺腺癌，證實

7、溶骨性骨轉移造模成功;
　　4.扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方可以減少裸鼠骨轉移率，抑制骨轉移部位增多;
　　5.扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方可以減輕骨轉移灶的骨質損壞，降低裸鼠骨轉移灶內腫瘤細胞與總細胞的比值。
　　二、益腎骨康方對溶骨性骨轉移瘤血清堿性磷酸酶的影響作用
　　目的：本實驗研究在前期工作的基礎上深入探究益腎骨康方對血清堿性磷酸酶的影響作用。
　　方法：以肺腺癌溶骨性骨轉移裸鼠模型為動物基礎模型，使

8、用酶免疫熒光法測定血清tALP，分別觀測各組裸鼠血清堿性磷酸酶的數(shù)值。
　　結果：模型對照組裸鼠血清堿性磷酸酶平均水平高于正常值一倍，益腎骨康方中劑量組與模型對照組比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，益腎骨康方高劑量組及西藥組血清堿性磷酸酶較模型對照組下降，與模型對照組相比有顯著性差異(P＜0.05);益腎骨康方低劑量組、中西藥組所測血清堿性磷酸酶與模型對照組相比有極顯著性差異(P＜0.01);西藥組、益腎骨康方高劑量組及益腎骨康方

9、中劑量組血清堿性磷酸酶無顯著性差異(P＞0.05)。上述結果表明益腎骨康方及帕米磷酸二鈉能夠降低溶骨性骨轉移瘤裸鼠血清堿性磷酸酶。
　　結論：
　　1.扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方可以降低血清堿性磷酸酶的異常升高，以降低骨質破壞率，從而抑制骨轉移的形成;
　　2.血清堿性磷酸酶可作為骨轉移瘤的診斷、監(jiān)測預后、化療效果、手術效果評價的血清學檢驗指標。
　　三、蛋白質印跡法檢測扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方對溶骨性骨轉移裸

10、鼠基質來源趨化因子蛋白表達的調控作用
　　目的：本實驗研究在前期工作的基礎上，深入探究益腎骨康方對溶骨性骨轉移裸鼠CXCL12蛋白表達的調控作用。
　　方法：以肺腺癌溶骨性骨轉移裸鼠模型為基礎，采用蛋白質印跡法檢測益腎骨康方對溶骨性骨轉移裸鼠CXCL12蛋白的表達。并使用Image J圖像分析軟件進行圖像分析。
　　結果：模型對照組、西藥組CXCL12蛋白的表達較高，相比無顯著性差異(P＞0.05);益腎骨康方高劑量組

11、、中劑量組CXCR12蛋白的表達較低，與模型對照組相比有顯著性差異(P＜0.05);益腎骨康方低劑量組與中西藥組未發(fā)生骨轉移瘤，CXCR12蛋白表達極低，與模型對照組相比有極顯著性差異(P＜0.01);西藥組與模型對照組骨轉移瘤CXCL12蛋白的表達無顯著性差異(P＞0.05);益腎骨康方高劑量組與中劑量組CXCR12蛋白的表達無顯著性差異(P＞0.05)。上述結果表明益腎骨康方能夠降低CXCL12蛋白的表達，而帕米磷酸二鈉對CXCL1

12、2蛋白表達幾乎沒有降低作用。
　　結論：扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方可以通過抑制CXCR12的表達進而抑制骨組織對癌細胞的趨化作用，起到防止骨破壞的作用，從而抑制骨轉移的發(fā)生。
　　四、蛋白質印跡法檢測扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方對溶骨性骨轉移裸鼠趨化因子受體蛋白表達的調控作用
　　目的：本實驗研究以前期工作為基礎，深入探討扶正解毒化瘀中藥益腎骨康方對溶骨性骨轉移裸鼠CXCR4蛋白表達的調控作用。
　　方法：以肺腺癌

13、溶骨性骨轉移裸鼠模型為基礎，采用蛋白質印跡法檢測益腎骨康方對溶骨性骨轉移裸鼠CXCR4蛋白的表達。并使用Image J圖像分析軟件進行圖像分析。
　　結果：模型對照組、西藥組、益腎骨康方高劑量組及中劑量組股骨轉移瘤CXCR4蛋白的表達較高，與模型對照組相比無顯著性差異(P＞0.05);益腎骨康方低劑量組骨轉移瘤CXCR4蛋白幾乎不表達，與模型對照組及其它組相比有顯著性差異(P＜0.05)，中西醫(yī)結合組CXCR4表達呈陰性結果，與模