鋅-α2-糖蛋白對造影劑腎病早期預(yù)測及其在碘造影劑誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的:造影劑腎?。╟ontrast-induced nephropathy，CIN）已成為院內(nèi)獲得性急性腎損傷的常見病因，而臨床上尚無敏感的檢測指標及有效的治療手段。如何早期診斷對預(yù)防CIN極其重要。而血肌酐在CIN診斷的敏感性及特異性方面存在缺陷，故發(fā)現(xiàn)一種能在CIN早期即可檢測到的、敏感的、特異的生物學標記物對預(yù)防CIN的發(fā)生具有重要意義。鋅-α2-糖蛋白(Zinc-α2-glycoprotein，ZAG)是正常腎小管上皮細胞表達的

2、糖蛋白。本研究通過檢測經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(percutaneous coronary intervention，PCI)患者尿中ZAG水平的變化情況，以及含碘造影劑(iodine contrast media，CM)誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細胞(NRK-52E)ZAG表達與細胞凋亡關(guān)系，來評價尿中ZAG水平對CIN的早期預(yù)測作用，并初步探討ZAG在CIN發(fā)病機制中的作用。
　　方法:選取我院心內(nèi)科行PCI術(shù)患者（包括不穩(wěn)定型心絞痛、陳

3、舊性及急性心肌梗死的患者）10例，所有患者獲知情同意。應(yīng)用的CM均為低滲非離子型單體造影劑碘佛醇370。造影劑注射方法均為Judkins法行冠脈造影，并根據(jù)術(shù)中所見冠狀動脈狹窄程度行冠脈介入治療。入選標準:所有患者均行PCI術(shù)，術(shù)前采取靜脈血，檢測血肌酐，并根據(jù)MDRD公式計算eGFR(estimated glomerularfiltration rate估測腎小球濾過率)≥90ml/min·1.73m2。排除標準:1）慢性腎臟病;2)

4、各種原因所致的急性腎損傷，如近期腎毒性藥物的應(yīng)用、腎前性缺血等;3）合并糖尿病、惡性腫瘤、高脂血癥的患者;4）7天內(nèi)接受過靜脈造影的患者。留取患者術(shù)前及術(shù)后2h、24h尿液標本，-40℃冰箱保存，檢測尿肌酐水平，用ELISA法檢測尿中ZAG濃度，尿ZAG水平用尿ZAG濃度與尿肌酐比值(mg/g)表示，同時采取造影前靜脈血標本，檢測生化指標包括:血肌酐、血尿素、膽固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯。同時體外培養(yǎng)NRK-52E細胞，用不同碘濃度(

5、25、50、100、140mgI/ml)的碘佛醇作用細胞2h，用碘濃度為100mgI/ml的碘佛醇作用細胞2h、4h、6h。應(yīng)用流式AnnexinⅤ-FITC/PI雙染色法檢測不同碘濃度及不同時間誘導(dǎo)下細胞凋亡率，同時分別收集各組細胞總蛋白，應(yīng)用Western blot法檢測各組細胞ZAG蛋白表達情況。
　　結(jié)果:10例患者中，男6例，女4例，平均年齡58.40±6.50歲，術(shù)前尿素氮5.98±0.67mmol/L，膽固醇3.97

6、±0.76mmol/L，甘油三酯1.39±0.34mmol/L，低密度脂蛋白2.09±0.57mmol/L，造影劑用量101.00±15.24ml，血肌酐63.83±9.65umol/L，計算eGFR為104.07±11.08ml/min·1.73m2。術(shù)前尿中ZAG水平為22.85±11.10mg/g。術(shù)后2h、24h尿中ZAG水平分別為67.44±44.94mg/g、32.24±18.55mg/g，與術(shù)前尿中ZAG水平相比，術(shù)后2h

7、尿中ZAG水平較前升高，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。術(shù)后24h雖較2h有下降，但仍高于術(shù)前，差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。各組尿ZAG水平與各項主要指標均無相關(guān)性。體外培養(yǎng)的NRK-52E細胞，用不同碘濃度的碘佛醇作用細胞2h，及碘濃度為100mgI/ml的碘佛醇作用細胞不同時間后，應(yīng)用流式AnnexinⅤ-FITC/PI雙染色法檢測細胞凋亡率，與對照組相比，細胞凋亡率呈碘濃度(P＜0.05，n=3)和時間依賴性(P＜0.05