無機活性元素支架材料對表皮細胞的生物誘導作用的研究.pdf

1、目的：
　　表皮干細胞由于其無限分裂增殖及可以在一定條件誘導下分化為所需細胞的能力,在尋找組織工程皮膚的種子細胞時,可將其視作待選者。本研究使用分選出的表皮干細胞與無機活性元素支架材料復合培養(yǎng)以及應用支架材料治療46只SD大鼠背部創(chuàng)面,以探討無機活性誘導元素支架材料對于上皮細胞的生物誘導作用。
　　方法：
　　(1)細胞實驗:選擇8例唇裂患兒(2-5歲)手術后丟棄的正常皮膚組織,應用Ⅳ型膠原粘附法分選表皮干細胞(ESC

2、),將分選好的細胞分為兩組,一組加入無機活性元素支架材料為實驗組,另一組為對照組,且對分選的細胞進行培養(yǎng)、鑒定,同時測定細胞培養(yǎng)11、21d時的細胞增殖倍數,培養(yǎng)上清液1d,4d,7d,10d,12d,15d,18d,20d時的PH水平。(2)動物實驗:在40只SD大鼠背部用手術方式制成對稱性的以0.5CM及1.5CM為半徑,深度為0.15～0.25mm的圓形創(chuàng)面(各20只共40個),采用自身同體對照法進行實驗,將大鼠背部兩側的創(chuàng)面各分

3、為治療組和對照組,治療組創(chuàng)面均勻撒布支架材料1g/100cm2并覆以消毒油紗布;對側的對照組創(chuàng)面涂抹紅霉素軟膏并用油紗布覆蓋。觀察治療3、5、7、10、13、18d時創(chuàng)面皮膚的病理學改變并計算創(chuàng)面愈合率。
　　結果：
　　1.細胞試驗:
　　(1)利用0.1mg/ml及0.2mg/ml濃度的Ⅳ型膠原在不同的時間段分別粘附、分選表皮干細胞,其中以2mg/ml濃度的Ⅳ型膠原20分鐘粘附的表皮干細胞傳代后細胞增殖分化情況較好

4、。
　　(2)培養(yǎng)基上清液中的PH在第一天培養(yǎng)細胞后偏堿性,從第4-20天逐漸降低。
　　(3)細胞培養(yǎng)至11d、21d時,實驗組細胞的增殖倍數明顯高于對照組(P<0.01).
　　2.動物實驗:不同半徑的兩種創(chuàng)面,治療組創(chuàng)面肉芽組織增生或上皮爬行的速度均明顯早于相同大小半徑的對照組創(chuàng)面。0.5cm半徑創(chuàng)面?zhèn)?、10、13d的愈合率以及1.5cm半徑創(chuàng)面?zhèn)?、10、18d的愈合率均明顯高于相同大小半徑的對照組創(chuàng)面(

5、P<0.05).
　　結論：
　　表皮干細胞作為組織工程皮膚的種子細胞之一,具有巨大的增殖及分化潛能,在與無機活性元素支架材料相互作用的過程中,體現(xiàn)了支架材料對其增殖、分化及創(chuàng)面愈合的促進作用。
　　1.運用Ⅳ型膠原分選法初步分選表皮干細胞,是一種可以簡潔迅速地分選出增殖分化活力較高的表皮干細胞的方法。
　　2.24h后上清液的堿性PH下降,且不會妨礙細胞貼壁及增殖。無機活性元素支架材料的存在增加了細胞貼壁率。細