胡椒堿在體外對表皮黑素細(xì)胞生長和遷移的影響.pdf

1、背景：
　　胡椒堿是中藥黑胡椒、蓽茇等主要的單體成分，印度古方中曾有口服黑胡椒并配合其它藥物治療白癜風(fēng)的記載，我院選取女貞子、黑胡椒、透骨草、浮萍、烏蕨組成非光敏組方中藥2號，其中黑胡椒、女貞子為君藥，臨床外用治療白癜風(fēng)取得較好療效。國外研究發(fā)現(xiàn)黑胡椒提取物以及其單體成分胡椒堿可促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞的增殖和黑素量的合成，刺激黑素細(xì)胞的增殖和分化。國內(nèi)研究表明胡椒堿可以顯著促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞黑素的合成，在試驗濃度可直接上調(diào)蘑菇酪氨酸酶的活性；

2、并可通過上調(diào)酪氨酸酶和TRP1的表達(dá)明顯促進(jìn)表皮黑素細(xì)胞的黑素合成。最近有學(xué)者應(yīng)用無色小鼠模型探討胡椒堿及其類似合成物在白癜風(fēng)治療中的作用，研究顯示，胡椒堿及其類似合成物可以刺激小鼠均勻復(fù)色。局部外涂小鼠皮膚并聯(lián)合小劑量的UVR照射，能顯著提高色素沉著反應(yīng)，美容效果較常規(guī)治療方法好。由此可見胡椒堿可影響黑素細(xì)胞的生物學(xué)活性，并作為一種治療白癜風(fēng)的新的藥物有較好的應(yīng)用前景。目前胡椒堿治療白癜風(fēng)的機理尚不明確，且對表皮黑素細(xì)胞遷移影響的研究

3、未見報道，為進(jìn)一步探討其可能的作用機理，我們研究中藥單體胡椒堿對人表皮黑素細(xì)胞生長及遷移的影響，為臨床研發(fā)安全有效的治療白癜風(fēng)的新藥提供實驗依據(jù)。
　　目的：
　　研究中藥單體胡椒堿對表皮黑素細(xì)胞的增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成及黑素細(xì)胞遷移的影響。
　　方法：
　　培養(yǎng)人表皮黑素細(xì)胞以系列濃度的胡椒堿作用72小時，并以相應(yīng)的溶媒作為對照，采用MTT法測定細(xì)胞增殖情況，多巴氧化法測定酪氨酸酶活性，NaOH裂解法測定

4、黑素含量。6.25ug/ml胡椒堿作用48小時后，應(yīng)用細(xì)胞劃線法和微孔濾膜分析法分析中藥單體胡椒堿對人表皮黑素細(xì)胞遷移的作用。
　　結(jié)果：
　　胡椒堿在3.125ug/ml時，對黑素細(xì)胞增殖無明顯影響，與空白對照組相比無顯著性差異；濃度在6.25-12.5ug/ml時，能促進(jìn)黑素細(xì)胞的增殖（P<0.05），以6.25ug/ml作用最為顯著（P<0.01）。濃度增加至25ug/ml時對黑素細(xì)胞增殖無明顯影響；當(dāng)濃度提高至50u

5、g/ml以上時對黑素細(xì)胞生長有明顯影響（P<0.01），細(xì)胞生長不理想，胞體變大，折光性減弱，并于48小時內(nèi)逐漸脫壁死去。在不同的時間點用6.25ug/ml的胡椒堿處理黑素細(xì)胞，研究發(fā)現(xiàn)處理24小時、48小時對黑素細(xì)胞增殖無明顯作用。處理72小時能明顯促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖，與對照組相比，有顯著性差異（P<0.05）。濃度3.125～12.5ug/ml時，胡椒堿對黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性無影響，而增加至25ug/ml和50ug/ml時，酪氨酸酶活

6、性明顯增加，與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。胡椒堿在濃度3.125～50ug/ml對黑素合成有明顯的促進(jìn)作用，且以12.5ug/ml作用最為顯著，各濃度組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。在遷移實驗中，為了排除細(xì)胞增殖的干擾，選擇胡椒堿的作用濃度和作用時間分別為6.25ug/ml和48 h。研究表明中藥單體胡椒堿對人表皮黑素細(xì)胞無促遷移作用（P≥0.05）。
　　結(jié)論：
　　中藥單體胡椒堿可促進(jìn)