青蒿琥酯對(duì)表皮鱗癌a431細(xì)胞增殖和凋亡的影響

1、青蒿琥酯青蒿琥酯對(duì)表皮鱗癌對(duì)表皮鱗癌A431細(xì)胞增殖和凋細(xì)胞增殖和凋亡的影響亡的影響江忠勇梅峰于彬韓鵑田衍平李世峰周德山(第三軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部組胚教研室重慶400038)摘要：：目的初步探討青蒿琥酯(ArtesunateART)對(duì)表皮鱗癌細(xì)胞生長和凋亡的影響及其相關(guān)機(jī)制。方法方法以人表皮鱗癌A431細(xì)胞系和永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞系為研究對(duì)象，順鉑（DDP）為陽性對(duì)照，通過MTT法和流式細(xì)胞術(shù)觀察ART對(duì)A431和HaCaT細(xì)胞增

2、殖和凋亡的影響和去鐵敏（DFOM）的阻斷效果。結(jié)果結(jié)果ART對(duì)癌細(xì)胞具有較明顯的殺傷作用而對(duì)永生化的正常角質(zhì)形成細(xì)胞的損害顯著低于DDP。ART能夠誘導(dǎo)A431凋亡，其凋亡率為（19.87%0.03）%，加入DFOM后，ART誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡率下降至（7.37%0.02）%。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)ART主要使A431積聚于S期[(67.6%4.12)%P0.05]。結(jié)論ART可能通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞A431凋亡發(fā)揮抑制其生長的作用，且在

3、一定范圍內(nèi)與藥物劑量呈正相關(guān)，這種作用與Fe2介導(dǎo)有關(guān)。因ART對(duì)正常細(xì)胞的殺傷作用明顯低于毒副作用明顯低于DDP，所以，可能更具臨床應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：青蒿琥酯；皮膚癌；A431；細(xì)胞凋亡作者簡介；江忠勇，男，重慶市人，碩士，主要從事腫瘤發(fā)生機(jī)制研究。電話；（023）68752229。通訊作者；周德山，電話（023）68775266，email:dszhou2000@Theproliferationapoptosisofepide

4、rmalSquamouscelllinesA431affectedbyArtesunateJIANGzhongyongMEIfengYUNbinHANjuanTIANyanping，LIshifeng，ZHOUdeshan.（DepartmentofHistologyEmbryologyCollegeofMedicineThirdMilitaryMedicalUniversityChongqing400038China）Abstract

5、:ObjevectToinvestigatetheeffectsthatgrowthapoptosisofepidermalcarcinomacellaffectedbyArtesunate(ART)itsmechanism.Methods:ThegrowthinhibitionapoptosiscellcyclesofA431(acelllineofmalignantepidermalcarcinoma)HaCaT(anmalkera

6、tinocytecellline)weredetectedwithMTTFCM.Cisplatin(DDP)wasaspositivecontrol.DFOM(deferoxaminemesylate)wasusedtoblocktheroleofART.Results:ARTcouldinhibitA431growthseminhibitionratiois60umolL.TheresultsshowedthatARTcouldpar

7、tlyinduceA431cellapoptosistheratioofapoptosis（19.87%0.03）%butpretreatmentwiththeDFOM(60umolL)theratioofapoptosiswasdecresedto（7.37%0.02）%ComparingwithDDPtheARTwaslowtoxicantfHaCaT.ThecellcyclewasmeasuredbyFCMtheA431cells

8、weremainlystoppedtoSphasereachingto（67.6%4.12）%(P0.05comparedwithcontrol).Conclusion:ARTislowtoxicanthighperfmancefepidermalcarcinomacellA431.TheapoptosisinducedbyARTwaspartlydependedonFe2.OurresultsindicatedthatARTmaypo

9、ssessapotentialdemintreatmentofhumanepidermalcarcinoma.Keywd:ArtesunatecancerSquamouscellA431apotosis低血清(0.1%)培養(yǎng)基條件下藥物作用48h，吸去培養(yǎng)液，換200μl無血清DMEM并加入20μl的MTT(5mg／m1)，輕振培養(yǎng)板，放回CO2孵箱繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄上清液，加DMSO150l孔，振蕩5～10min?？瞻渍{(diào)零，酶標(biāo)儀檢測

10、每孔570nm處的OD值，并計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞抑制率，重復(fù)3次。細(xì)胞生長抑制率=（1實(shí)驗(yàn)組吸光度值／對(duì)照組吸光度值）100%1.4形態(tài)學(xué)觀察60μmolLART處理腫瘤細(xì)胞A431100μmolLART處理永生化細(xì)胞系HaCaT48h光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞染色計(jì)數(shù)。1.5細(xì)胞周期檢測1.5.1步驟實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組（不加藥物），60μmolLART處理腫瘤細(xì)胞A431以及去鐵敏60μmolL4小時(shí)預(yù)處理組100μmolLART處

11、理永生化細(xì)胞系HaCaT以及去鐵敏60μmolL4小時(shí)預(yù)處理組48h.細(xì)胞培養(yǎng)及處理同上，收集各組細(xì)胞，用300l的PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞逐滴加入700l預(yù)冷的無水乙醇中，乙醇終濃度為70%，4℃避光固定48h；3500rmin離心5min，棄上清；PBS清洗兩次；用500l含100unitmlRNaseA的PBS重懸細(xì)胞，37℃避光孵育30min；加2mgmlPI至終濃度50gml，避光孵育30min，流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)細(xì)胞周期各期的細(xì)胞

12、數(shù)目。1.1.2試劑DMEM高糖(美國Hyclone)，標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(天津TBD)，順鉑(Sigma)，臺(tái)盼藍(lán)(Sigma)，MTT(Sigma)，DMSO(Sigma)，AnnexinVFITC細(xì)胞凋亡試劑盒（北京晶美）碘化丙啶（PI，Sigma），RNaseA（Sigma），去鐵敏（DFOM，Sigma）。1.1.3設(shè)備和儀器酶標(biāo)儀(BIORADmodel680)，流式細(xì)胞儀(美國BDFACSCalibur)1.2細(xì)胞培養(yǎng)用含10%