二甲雙胍聯(lián)合吉西他濱抑制人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1生長(zhǎng)及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文從以下及部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分二甲雙胍對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1的影響及機(jī)制
　　目的:研究二甲雙胍(Metformin,Met)在體外對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1生長(zhǎng)增殖、凋亡的影響,并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法:在體外培養(yǎng)人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1,應(yīng)用不同濃度的Met(0、1、2.5、5、10、20、40、60mmol/L)進(jìn)行干預(yù)24、48、72h。用細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)法(CCK-

2、8)檢測(cè)OD值,計(jì)算對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組CFPAC-1細(xì)胞的抑制率,并計(jì)算最適宜的Met IC50;取Met濃度為0、10、20、40mmol/L處理胰腺癌CFPAC-1細(xì)胞48h后進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期變化;AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)檢測(cè)FAS mRNA、Cyclin D1 mRNA、Bc

3、l-xl mRNA、Bax mRNA、Survivin mRNA、Caspase-3 mRNA表達(dá)水平的變化;蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)P-AMPK、FAS、Cyclin D1、Bcl-xl、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果:(1)CCK-8法顯示Met可明顯抑制CFPAC-1細(xì)胞的增殖,呈濃度—時(shí)間依賴性(P<0.05)。
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)及AnnexinV/PI早

4、期凋亡檢測(cè)顯示:CFPAC-1細(xì)胞經(jīng)Met作用48小時(shí)后,細(xì)胞周期G0/G1期比例上升,從(42.89±1.02)％上升至(65.98±0.27)％,(P<0.05)。細(xì)胞凋亡明顯,以早期凋亡為主,10mmol/L濃度下早期凋亡率為(13.77±1.31)％,20mmol/L濃度下為(22.63±1.45)％,而40mmol/L濃度下為(32.97±3.19)％,凋亡率與Met濃度呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　(3)RT-PCR

5、檢測(cè)FAS mRNA、Cyclin D1 mRNA、Bcl-xl mRNA、Bax mRNA、Survivin mRNA、Caspase-3 mRNA表明CFPAC-1細(xì)胞經(jīng)Met作用48小時(shí)后,FAS mRNA、Cyclin D1 mRNA、Bcl-xl mRNA、Survivin mRNA的表達(dá)呈濃度依賴性下降,Bax mRNA、Caspase-3 mRNA呈濃度依賴性上升,各濃度組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

6、r>　　(4)Western Blot結(jié)果顯示Met作用于CFPAC-1細(xì)胞48h后可使細(xì)胞中的P-AMPK蛋白表達(dá)增強(qiáng),FAS、Cyclin D1表達(dá)減弱;Bcl-xl、Survivin表達(dá)下調(diào),Bax、Caspase-3表達(dá)上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:Met呈濃度—時(shí)間依賴性抑制胰腺癌CFPAC-1細(xì)胞的生長(zhǎng),其機(jī)制可能是激活A(yù)MPK信號(hào)通路,從而下調(diào)FAS表達(dá)影響細(xì)胞代謝、下調(diào)Cyclin D1表達(dá)

7、阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期從而抑制細(xì)胞增殖;并且還能誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生早期凋亡。
　　第二部分二甲雙胍聯(lián)合吉西他濱對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1的影響
　　目的:探討二甲雙胍聯(lián)合吉西他濱(Gemcitabine,GEM)對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1的協(xié)同抑制作用及可能機(jī)制。
　　方法:以濃度為20mmol/L的二甲雙胍聯(lián)合低濃度(5μmol/L)的吉西他濱處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1,應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)O

8、D值,計(jì)算對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組CFPAC-1細(xì)胞的增殖抑制率;AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡情況;RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞凋亡因子Bcl-xl、Bax、Survivin、Caspase-3的mRNA表達(dá)水平;蛋白質(zhì)印跡法(Westen Blot)檢測(cè)凋亡蛋白Bcl-xl、Bax、Survivin、Caspase-3的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:Met和GEM都能有效地抑制人胰腺癌CFPAC-1細(xì)胞增殖,二者聯(lián)合作用后抑制效應(yīng)顯著增

9、強(qiáng)。Met組作用CFPAC-1細(xì)胞48h后細(xì)胞早期凋亡為(24.53±2.18)％,GEM組為(22.37±1.61)％,聯(lián)合組為(52.07±2.81)％。Met組、GEM組及聯(lián)合組Bcl-xl、Survivin mRNA及蛋白表達(dá)下調(diào),Bax、Caspase-3mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào),各組與對(duì)照組、聯(lián)合組與單藥組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:二甲雙胍聯(lián)合吉西他濱對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1增殖具有協(xié)同抑制作