淺藍菌素聯(lián)合吉西他濱抑制人胰腺癌細胞株BXPC-3生長及機制的實驗研究.pdf

1、第一部分，淺藍菌素對人胰腺癌細胞株BXPC-3的影響及機制
　　 目的：研究脂肪酸合酶（fattyacidsynthane，F(xiàn)AS）抑制劑淺藍菌素(Cerulenin，Cer)對胰腺癌BXPC-3細胞體外生長和凋亡的影響，并初步探討可能的作用機制。
　　 方法：采用不同濃度(O、2.5、5、10、20、40μg/ml)Cer處理胰腺癌細胞BXPC-3，細胞增殖與毒性檢測法(CCK8)檢測OD值，計算對照組和各實驗組BXP

2、C-3細胞的抑制率，并計算最適宜的CerIC50；取Cer濃度為O、5、10、20μg/ml處理胰腺癌BXPC-3細胞后進行流式細胞術及AnnexinV/PI早期凋亡檢測細胞凋亡率和細胞周期的變化；反轉錄聚合酶鏈反應(ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction,RT-PCR)檢測FASmRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspas

3、e3mRNA表達水平的變化；免疫印跡法(WesternBlot)檢測細胞凋亡因子Bcl-2、Bax蛋白表達情況，酶測定法檢測Caspase8、Caspase9、Caspase3活性。
　　 結果：(1)CCK8法顯示Cer可明顯抑制BXPC-3細胞的生長，并隨著濃度的增加和作用時間的延長而明顯增強(P＜0.05)。(2)流式細胞術及AnnexinV\PI早期凋亡檢測出BXPC-3細胞經(jīng)Cer作用48小時后，細胞周期S期比例上升，

4、從（5.18±0.25）％上升到（25.15±1.15）%，G2期細胞比例下降(P＜0.05)。細胞有明顯凋亡，且以早期凋亡為主，在5μg/ml濃度下早期凋亡率為（11.67±0.65）%，l0μg/ml濃度下為（29.1±1.31）%，而在20μg/ml濃度下為（48.8±1.23）%，與Cer濃度呈正相關。(3)RT-PCR檢測FASmRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、C

5、aspase3mRNA表明BXPC-3細胞經(jīng)Cer作用48小時后，F(xiàn)ASmRNA、Bcl-2mRNA的表達呈濃度依賴性下降，BaxmRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspase3mRNA呈濃度依賴性上升，各濃度組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(4)WesternBlot結果顯示Cer作用于BXPC-3細胞48h可使細胞中的Bcl-2蛋白表達下降，Bax蛋白表達升高，在Cer0μg/ml、5μ

6、g/ml、10μg/ml、20μg/ml濃度下Bcl-2/Bax比值分別為（4.29±0.15）、（1.82±0.02）、（1.01±0.08）、（0.38±0.05），差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(5)酶測定法檢測Cer作用于BXPC-3細胞48h可使Caspase8、Caspase9、Caspase3的活性增加，且呈濃度依賴性(P＜0.05)。Cer5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml濃度組Caspase3活性分別為

7、對照組的（1.75±0.31）、（3.27±0.01）、（4.96±0.02）倍；Caspase9活性分別為對照組的（1.40±0.4）、（2.12±0.06）、（3.39±0.02）倍；Caspase8活性分別為對照組的（1.26±0.07）、（1.86±0.11）、（2.5±0.02）倍。
　　 結論：Cer以時間、濃度依賴方式抑制胰腺癌BXPC-3細胞的生長，其機制可能是直接抑制腫瘤細胞增殖；阻滯細胞周期于S期；主要通過線

8、粒體途徑誘導細胞發(fā)生早期凋亡。
　　 第二部分，淺藍菌素聯(lián)合吉西他濱對胰腺癌細胞BXPC-3的影響
　　 目的：探討Cer聯(lián)合吉西他濱(Gemcitabine，GEM)對胰腺癌細胞BXPC-3的協(xié)同抑制作用及機制。
　　 方法：以濃度為10μg/ml的Cer聯(lián)合20μmol/L的GEM處理對數(shù)生長期的人胰腺癌BXPC-3細胞，應用CCK8法檢測OD值，計算對照組和各實驗組BXPC-3細胞的抑制率；AnnexinV

9、/PI雙染法檢測BXPC-3細胞早期凋亡情況；RT-PCR半定量檢測Bcl-2mRNA、BaxmRNA表達水平的變化，WesternBlot檢測細胞凋亡因子蛋白Bcl-2、Bax表達情況。
　　 結果：Cer和GEM都能有效地抑制人胰腺癌BXPC-3細胞增殖，二者聯(lián)合作用后，具有協(xié)同效應；Cer組作用BXPC-3細胞48h時細胞早期凋亡為（31.37±1.04）%，GEM組為（38.33±0.75）%，聯(lián)合組為（69.43±0.