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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分,淺藍(lán)菌素對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株BXPC-3的影響及機(jī)制
目的:研究脂肪酸合酶(fattyacidsynthane,F(xiàn)AS)抑制劑淺藍(lán)菌素(Cerulenin,Cer)對(duì)胰腺癌BXPC-3細(xì)胞體外生長(zhǎng)和凋亡的影響,并初步探討可能的作用機(jī)制。
方法:采用不同濃度(O、2.5、5、10、20、40μg/ml)Cer處理胰腺癌細(xì)胞BXPC-3,細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)法(CCK8)檢測(cè)OD值,計(jì)算對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組BXP
2、C-3細(xì)胞的抑制率,并計(jì)算最適宜的CerIC50;取Cer濃度為O、5、10、20μg/ml處理胰腺癌BXPC-3細(xì)胞后進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)及AnnexinV/PI早期凋亡檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期的變化;反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction,RT-PCR)檢測(cè)FASmRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspas
3、e3mRNA表達(dá)水平的變化;免疫印跡法(WesternBlot)檢測(cè)細(xì)胞凋亡因子Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)情況,酶測(cè)定法檢測(cè)Caspase8、Caspase9、Caspase3活性。
結(jié)果:(1)CCK8法顯示Cer可明顯抑制BXPC-3細(xì)胞的生長(zhǎng),并隨著濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯增強(qiáng)(P<0.05)。(2)流式細(xì)胞術(shù)及AnnexinV\PI早期凋亡檢測(cè)出BXPC-3細(xì)胞經(jīng)Cer作用48小時(shí)后,細(xì)胞周期S期比例上升,
4、從(5.18±0.25)%上升到(25.15±1.15)%,G2期細(xì)胞比例下降(P<0.05)。細(xì)胞有明顯凋亡,且以早期凋亡為主,在5μg/ml濃度下早期凋亡率為(11.67±0.65)%,l0μg/ml濃度下為(29.1±1.31)%,而在20μg/ml濃度下為(48.8±1.23)%,與Cer濃度呈正相關(guān)。(3)RT-PCR檢測(cè)FASmRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、C
5、aspase3mRNA表明BXPC-3細(xì)胞經(jīng)Cer作用48小時(shí)后,F(xiàn)ASmRNA、Bcl-2mRNA的表達(dá)呈濃度依賴性下降,BaxmRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspase3mRNA呈濃度依賴性上升,各濃度組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)WesternBlot結(jié)果顯示Cer作用于BXPC-3細(xì)胞48h可使細(xì)胞中的Bcl-2蛋白表達(dá)下降,Bax蛋白表達(dá)升高,在Cer0μg/ml、5μ
6、g/ml、10μg/ml、20μg/ml濃度下Bcl-2/Bax比值分別為(4.29±0.15)、(1.82±0.02)、(1.01±0.08)、(0.38±0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(5)酶測(cè)定法檢測(cè)Cer作用于BXPC-3細(xì)胞48h可使Caspase8、Caspase9、Caspase3的活性增加,且呈濃度依賴性(P<0.05)。Cer5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml濃度組Caspase3活性分別為
7、對(duì)照組的(1.75±0.31)、(3.27±0.01)、(4.96±0.02)倍;Caspase9活性分別為對(duì)照組的(1.40±0.4)、(2.12±0.06)、(3.39±0.02)倍;Caspase8活性分別為對(duì)照組的(1.26±0.07)、(1.86±0.11)、(2.5±0.02)倍。
結(jié)論:Cer以時(shí)間、濃度依賴方式抑制胰腺癌BXPC-3細(xì)胞的生長(zhǎng),其機(jī)制可能是直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖;阻滯細(xì)胞周期于S期;主要通過(guò)線
8、粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生早期凋亡。
第二部分,淺藍(lán)菌素聯(lián)合吉西他濱對(duì)胰腺癌細(xì)胞BXPC-3的影響
目的:探討Cer聯(lián)合吉西他濱(Gemcitabine,GEM)對(duì)胰腺癌細(xì)胞BXPC-3的協(xié)同抑制作用及機(jī)制。
方法:以濃度為10μg/ml的Cer聯(lián)合20μmol/L的GEM處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胰腺癌BXPC-3細(xì)胞,應(yīng)用CCK8法檢測(cè)OD值,計(jì)算對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組BXPC-3細(xì)胞的抑制率;AnnexinV
9、/PI雙染法檢測(cè)BXPC-3細(xì)胞早期凋亡情況;RT-PCR半定量檢測(cè)Bcl-2mRNA、BaxmRNA表達(dá)水平的變化,WesternBlot檢測(cè)細(xì)胞凋亡因子蛋白Bcl-2、Bax表達(dá)情況。
結(jié)果:Cer和GEM都能有效地抑制人胰腺癌BXPC-3細(xì)胞增殖,二者聯(lián)合作用后,具有協(xié)同效應(yīng);Cer組作用BXPC-3細(xì)胞48h時(shí)細(xì)胞早期凋亡為(31.37±1.04)%,GEM組為(38.33±0.75)%,聯(lián)合組為(69.43±0.
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