玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63阻斷突變體的篩選及分析.pdf

1、玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63是劉大群教授在馬鈴薯瘡痂病自然衰退土壤中分離得到的菌株。通過(guò)室內(nèi)試驗(yàn)表明，該菌株對(duì)多種植物病原真菌和細(xì)菌有較強(qiáng)的抑制作用；溫室和大田試驗(yàn)表明該菌株的代謝產(chǎn)物對(duì)棉花黃萎病和瓜類(lèi)白粉病有較好的防效。其有效成分和作用機(jī)理正在研究中。 抗生素阻斷突變體是推斷抗生素合成途徑的基礎(chǔ)理論研究的好材料。本研究以玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63為出發(fā)菌株，以棉花黃萎病菌為指示菌，通過(guò)紫外線(xiàn)、氯化鋰(

2、LiC1)、微波、硫酸二乙酯(DES)等誘變劑對(duì)其進(jìn)行了處理。最終從微波處理10s、35s和40s的菌株中共篩選到6株對(duì)棉花黃萎病菌喪失拮抗活性的突變體，分別命名為MV11，MV18，MV21，MV22，MV35和MV40；從DES處理90min的菌株中篩選到2株生物合成阻斷突變體，命名為DE01和DE02。8株突變體連續(xù)傳代十代后，性狀保持穩(wěn)定，對(duì)指示菌無(wú)拮抗活性。 對(duì)突變體的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。通過(guò)插片培養(yǎng)結(jié)合光學(xué)顯微鏡觀

3、察發(fā)現(xiàn)突變體孢子絲螺旋形，孢子橢圓形，在形態(tài)上沒(méi)有顯著變化，但是突變體表現(xiàn)出在基內(nèi)菌絲及氣生菌絲顏色上的變化?；鶅?nèi)菌絲顏色比出發(fā)菌株淺，氣生菌絲顏色有7株變?yōu)榛揖G色，孢子產(chǎn)生豐富；1株變?yōu)楹谏?，孢子產(chǎn)生減少。突變體的抗菌譜發(fā)生變化，對(duì)所用8種供試病原菌均無(wú)抑菌作用。突變體與出發(fā)菌株16S rDNA存在較大差異，而且各突變體的突變熱點(diǎn)相似。將突變體菌絲體用丙酮萃取抽提，產(chǎn)物進(jìn)行HPLC分析，發(fā)現(xiàn)與出發(fā)菌株不同，突變體中抗生素的特征峰消失，

4、而在保留時(shí)間6min左右出現(xiàn)了新的吸收峰。 將突變體中的任意兩株菌兩兩配對(duì)，進(jìn)行共合成試驗(yàn)，結(jié)果表明，菌株DE02和MV40可以共同合成抗生素，其余6株突變體沒(méi)有表現(xiàn)此特性。抑菌圈出現(xiàn)在菌株DE02一側(cè)，說(shuō)明菌株DE02為轉(zhuǎn)化株，MV40為分泌株，它的阻斷位點(diǎn)在整個(gè)次級(jí)代謝途徑中處于DE02突變位點(diǎn)之后，這兩株突變體的阻斷可能是參與抗生素合成代謝途徑中酶的結(jié)構(gòu)基因某位點(diǎn)受突變而引起。而其它菌株不能作為轉(zhuǎn)化株或分泌株共合成抗生素。