玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63發(fā)酵液及菌絲中抑菌活性成分分離.pdf

1、玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63是從馬鈴薯瘡痂病自然衰退土壤中分離出的一種對多種植物病原菌有抑制作用的生防鏈霉菌。本文的主要目的是對該菌株的發(fā)酵液及其菌絲的主要成分進行分析，對其產(chǎn)生的抗生素進行分離純化，研究其性質(zhì)并確定其結(jié)構(gòu)。 本實驗采用以馬鈴薯瘡痂病菌為指示菌的平皿篩選模型，對發(fā)酵液中的活性成分進行篩選。發(fā)酵液采用甲殼素水溶液進行預(yù)處理，沉淀其中的蛋白質(zhì)成分，選用D312大孔吸附樹脂對發(fā)酵液進行初步的脂溶性、水溶性物

2、質(zhì)的分離。脂溶性部分采取乙醇梯度洗脫，分為40﹪、70﹪、95﹪三個梯度部分并輔以生物活性檢測跟蹤。確定70﹪乙醇的洗脫部分為活性集中部分后，利用分子篩凝膠柱SephadexG-15進行細(xì)分離，分步收取的下柱液采取Waters2996PDA檢測器進行檢測，色譜柱為AgilentZORBAXExtend-C18，5μm，4.6×250mm，色譜條件：30﹪-80﹪-100﹪(乙腈：水)流速：1mL/min，室溫。發(fā)現(xiàn)其中分離產(chǎn)物很不穩(wěn)定，

3、在冷藏條件下即發(fā)生分解。水溶性部分采取離子交換樹脂D81進行處理，以5﹪的HAc水溶液為交換液洗脫，經(jīng)過NH3·H2O調(diào)pH值到中性后利用分子篩凝膠柱SephadexG-10進行細(xì)分離，下柱液經(jīng)過活性跟蹤測定和蒸發(fā)光檢測器檢測的結(jié)果相互對照后，合并濃縮，冷凍干燥后獲得白色粉末狀物，經(jīng)檢測活性喪失。 對菌絲提取物采用以棉花黃萎病菌為指示菌的平皿篩選模型，菌絲采用丙酮為提取劑進行超聲處理，經(jīng)丙酮浸提后獲得母液。母液經(jīng)減壓蒸發(fā)后，利用