鏈霉菌Men-myco-93-63抗生素的提取純化及生防制劑的研究.pdf

1、鏈霉菌Men-myco-93-63是從馬鈴薯瘡痂病自然衰退土壤中分離出的一種對多種植物病原菌有抑制作用的生防鏈霉菌.該文的主要目的是對該菌株產(chǎn)生的抗生素進(jìn)行分離純化,確定其結(jié)構(gòu),建立抗生素中試提取工藝及開發(fā)出合理的生物農(nóng)藥劑型.首先采用了以棉花黃萎病菌,馬鈴薯瘡痂病菌為指示菌的平皿篩選模型,對發(fā)酵液中的活性成分進(jìn)行篩選.發(fā)酵液經(jīng)無機沉淀劑預(yù)處理,選用HZ803吸附樹脂吸附,洗脫液經(jīng)等體積的乙酸乙酯萃取獲得抗生素粗品.對獲得的抗生素粗品以

2、240 nm為檢測波長,利用Nova-Pak C18(WATERS)7.8mm× 300mm 6um反相柱,流速:2.0 mL/min,應(yīng)用30％-80%-100%甲醇對抗生素粗品進(jìn)行梯度洗脫.活性測定表明所獲得的13個組分對馬鈴薯瘡痂病菌均有有抑制作用,其中有7個組分對棉花黃萎病菌有抑制作用.在上述分析色譜的基礎(chǔ)之上,應(yīng)用制備液相以240 nm為檢測波長,流速:15 mL/min,應(yīng)用70%-70%-100%甲醇對抗生素粗品進(jìn)行分離,

3、得到7個峰,其中峰Ⅵ經(jīng)光譜圖比較與組分13同質(zhì),同時對峰Ⅵ進(jìn)行制備.對收集的峰Ⅵ,又經(jīng)94%甲醇等度分離收集其中的主峰(6-B).將主峰(6-B)40℃減壓濃縮,冷凍干燥獲得一淡黃色油滴,經(jīng)UV、MS、NMR、IR分析確定其為一分子量為390,分子式為C24H38O4的脂類化合物.另外,建立了該菌株的抗生素中試提取工藝流程,該流程包括以下步驟:1)發(fā)酵液的預(yù)處理和固液分離:0.08%聚丙烯酰胺對發(fā)酵液進(jìn)行絮凝預(yù)處理,4000 rpm,離

4、心20 min后過濾,將濾液pH調(diào)節(jié)到4.2)濃縮提取:發(fā)酵濾液經(jīng)80℃減壓濃縮,經(jīng)甲醇溶解過濾,去除沉淀.3)粗品獲得:甲醇溶解液中滴加10%乙醇,去除沉淀,濾液40℃減壓濃縮獲得抗生素粗品.并以獲得的抗生素粗品為原藥,制做了兩種生防制劑—乳油和聚醋酸乙烯酯(白乳膠)顆粒劑.乳油制劑經(jīng)室內(nèi)平皿試驗,證明對棉花黃萎病表現(xiàn)明顯的抑制作用,其1000倍稀釋液對蔬菜根結(jié)線蟲擁有明顯的殺傷作用,對根結(jié)線蟲的24h后校正死亡率為30.3%.聚醋酸