JNK介導(dǎo)的保護(hù)性自噬促進(jìn)了p53---或p53突變型結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)5-FU的耐藥.pdf

1、在腫瘤的形成和發(fā)展過(guò)程中，抑癌基因p53常常發(fā)生突變或缺失，而這種突變或缺失又是導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展和化療耐藥產(chǎn)生的重要原因。目前，盡管自噬在腫瘤形成過(guò)程中的促生長(zhǎng)和促死亡作用仍存在爭(zhēng)議，但大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究支持:在化療藥物所致的微環(huán)境壓力下，腫瘤細(xì)胞會(huì)激發(fā)自噬作為一種保護(hù)性的機(jī)制來(lái)對(duì)抗化療藥物的細(xì)胞毒性，最終導(dǎo)致化療耐藥的產(chǎn)生。最近，越來(lái)越多的研究證實(shí)MAPK信號(hào)通路調(diào)控的自噬是引起化療耐藥的重要機(jī)制。
　　目的:研究抗腫瘤藥物5-FU

2、在耐藥的p53缺失結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116 p53-/-和p53突變結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29中的自噬表達(dá)情況，分析其與5-FU耐藥的相關(guān)性并探討其可能的分子機(jī)制。
　　方法:通過(guò)Western blotting分析野生型p53(HCT116 p53+/+和RKO)、缺失型p53(HCT116 p53-/-)和突變型p53(HT-29)四種腸癌細(xì)胞中5-FU誘導(dǎo)的自噬的表達(dá)情況并分析其差異;在5-FU作用條件下，通過(guò)MTT、流式細(xì)胞技術(shù)、

3、Westernblotting、免疫熒光等方法檢測(cè)HCT116 p53-/-和HT-29細(xì)胞中腫瘤細(xì)胞的活力、自噬的表達(dá)水平及其可能的分子機(jī)制;通過(guò)化學(xué)藥物抑制劑和siRNA技術(shù)進(jìn)一步闡明HCT116 p53-/-和HT-29細(xì)胞對(duì)5-FU耐藥的可能分子機(jī)制。
　　結(jié)果:在HCT116 p53-/-和HT-29細(xì)胞中，5-FU誘導(dǎo)的自噬和JNK信號(hào)通路的活化呈現(xiàn)明顯的濃度或時(shí)間依賴(lài)性，但在HCT116 p53+/+和RKO細(xì)胞中卻

4、不存在這種現(xiàn)象;抑制自噬能夠明顯增強(qiáng)HCT116 p53-/-和HT-29細(xì)胞對(duì)5-FU的化療敏感性;JNK信號(hào)通路活化后能夠激活Bcl-2的磷酸化進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的發(fā)生;JNK特異性抑制劑SP600125和JNK siRNA抑制JNK的活性或表達(dá)后，5-FU誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬明顯下調(diào)，HCT116 p53-/-和HT-29細(xì)胞對(duì)5-FU的敏感性明顯增強(qiáng)。
　　結(jié)論:JNK/Bcl-2磷酸化介導(dǎo)的保護(hù)性自噬是HCT116 p53-/-