突變型p53與HSP70和HSP90的相互作用的研究.pdf

1、TP53基因編碼一種分子量為53kDa的蛋白質(zhì)，命名為p53。TP53基因的失活對腫瘤形成起重要作用。在所有惡性腫瘤中，50％以上會出現(xiàn)該基因的突變。TP53突變大多是由于單個氨基酸發(fā)生替換而導(dǎo)致的錯義突變。突變p53蛋白依然保留著全長序列，但是功能上卻從抑癌基因轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗颉?br>　　熱休克蛋白(HSP)是生物受到環(huán)境中物理、化學(xué)、生物、精神等刺激時發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)而合成的蛋白質(zhì)，是一類高度保守的蛋白質(zhì)，普遍存在于原核和真核生物中。HS

2、P家族的功能十分重要，主要作為分子伴侶、影響細胞凋亡、參與免疫和提高細胞耐熱性。
　　在本文中，我們首先通過免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析的方法在含有p53R273H突變體的乳腺癌細胞MDA-MB-468中鑒定與p53R273H相互作用的蛋白質(zhì)，一共鑒定到59個與p53R273H相互作用的蛋白。其中有9個蛋白為熱休克蛋白，其中屬于HSP70家族的有HSP70A2、HSP70A5、HSP70A6、HSP70A7、HSP70A8、HSP70A

3、1L，屬于HSP90家族的為HSP90AA1、HSP90AB1、HSP90B1。
　　然后，我們研究HSP70和HSP90對p53R273H蛋白功能的影響。我們將HSP90-AB1表達質(zhì)粒和一個HSP70-A5表達質(zhì)粒與p53R273H表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入Hek293細胞中，然后檢測p53R273H蛋白的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，HSP70和HSP90都能增強p53R273H的穩(wěn)定性，而且HSP70與HSP90共轉(zhuǎn)染比單獨轉(zhuǎn)染一種質(zhì)粒時p53R

4、273H的穩(wěn)定性更好。而用HSP70的抑制劑Pifithrin-μ或/和HSP90的抑制劑17-AAG處理MDA-MB-468細胞，則促進p53R273H蛋白的降解。進一步研究表明，在MDA-MB-468細胞中干擾p53R273H突變體抑制細胞增殖，用HSP70的抑制劑Pifithrin-μ或/和HSP90的抑制劑17-AAG處理MDA-MB-468細胞，抑制細胞增殖和遷移、促進細胞凋亡。這些結(jié)果說明，HSP70和HSP90可能通過與p