重組人P53腺病毒對(duì)人結(jié)腸癌和胃癌細(xì)胞的影響及其化療的增敏作用.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:觀察重組人p53腺病毒感染人結(jié)腸癌細(xì)胞及不同分化程度的胃癌細(xì)胞后,外源性p53基因在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制及化療敏感性的影響;探討重組人p53腺病毒注射液(rAd-p53)抗腫瘤及化療增敏作用的機(jī)制。
   方法:
   1、不同濃度的rAd-p53及OXA單獨(dú)或聯(lián)合作用于結(jié)腸癌細(xì)胞后,CCK-8法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率;免疫組化染色(S-P)檢測(cè)p53蛋白、凋亡蛋白bax、bcl-2在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)

2、;流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及凋亡蛋白Caspase-3的表達(dá)。
   2、不同濃度的rAd-p53及OXA單獨(dú)或聯(lián)合作用于不同分化程度的胃癌細(xì)胞后,MTT法測(cè)定細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率;S-P檢測(cè)p53蛋白、凋亡蛋白bax、bcl-2在結(jié)腸癌、胃癌細(xì)胞中的表達(dá);FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及凋亡蛋白Caspase-3的表達(dá)。
   結(jié)果:
   一.MTT及CCK-8法檢測(cè)結(jié)果
   1.不同濃度rAd-p53

3、、OXA單藥及聯(lián)合作用對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW1116生長(zhǎng)的影響
   不同濃度rAd-p53、OXA單藥及聯(lián)合作用24h后,結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)即產(chǎn)生明顯抑制作用,隨著藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng),結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用逐漸增強(qiáng),且兩藥聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用明顯高于單藥。
   2.不同濃度rAd-p53、OXA單藥及聯(lián)合作用對(duì)不同分化程度的胃癌細(xì)胞SGC-7901(中分化)、BGC-823(低分化)、HGC-27(未分

4、化)生長(zhǎng)的影響
   隨著藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng),對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用逐漸增強(qiáng),且兩藥聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞的抑制作用明顯高于單藥,同時(shí)細(xì)胞分化程度越高,其藥物作用后的生長(zhǎng)抑制作用越明顯,即:SGC-7901>BGC-823>HGC-27。
   二.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果顯示
   1.rAd-p53作用于腫瘤細(xì)胞后,p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi),p53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率較對(duì)照組顯著增高(P<0.05),且隨

5、著rAd-p53濃度的增加而上升,但OXA濃度對(duì)p53蛋白的表達(dá)無影響(P>0.05)。
   2.不同濃度rAd-p53、OXA單藥及聯(lián)合作用于腫瘤細(xì)胞后,均可下調(diào)bcl-2、上調(diào)bax蛋白的表達(dá)(P<0.05),且隨著藥物濃度的增加,其上調(diào)bax或下調(diào)bcl-2的作用越顯著。
   三.FCM檢測(cè)結(jié)果顯示
   1.不同濃度rAd-p53、OXA單藥及聯(lián)合作用于腫瘤細(xì)胞后,與對(duì)照組相比,細(xì)胞凋亡率顯著增高(P

6、<0.05)。
   2.藥物作用于腫瘤細(xì)胞后,凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05),且隨著藥物濃度的增加,Caspase-3蛋白的表達(dá)逐漸增加。提示Caspase-3可能參與了細(xì)胞凋亡過程。
   結(jié)論:
   1.rAd-p53能夠有效抑制人結(jié)腸癌(SW1116)及胃癌細(xì)胞(SGC-7901、BGC-823、HGC-27)的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡,且隨藥物濃度及作用時(shí)間的增加,對(duì)細(xì)胞的生

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