結(jié)核分枝桿菌耐藥相關(guān)的雙組份系統(tǒng)的篩選.pdf

1、結(jié)核?。╰uberculosis，TB）是由結(jié)核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的嚴重危害公眾健康的傳染病，每年新發(fā)的結(jié)核病例數(shù)就超940萬例，每年病死人數(shù)也超過130萬。結(jié)核菌耐藥不但給社會帶來了極大的經(jīng)濟負擔；而且是結(jié)核病擴散和蔓延的重要原因。因此，深入研究結(jié)核分枝桿菌的耐藥機制，尋求新的耐藥診斷和治療靶點，對于結(jié)核病的防控具有重要意義。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，細菌雙組份系統(tǒng)與細菌的耐藥，甚至是

2、耐多藥存在密切關(guān)系。而目前尚未有人對與MTB耐藥相關(guān)的TCS進行全面分析。本研究的目的是通過對MTB耐多藥菌株和敏感菌株的11個完整的TCS反應調(diào)節(jié)子和2個TCS孤兒反應調(diào)節(jié)子（Orphan Response Regulator）的表達進行檢測，以篩查差異表達的TCS反應調(diào)節(jié)子，并通過藥物誘導實驗對差異表達的TCS反應調(diào)節(jié)子進行鑒定，以確認這些TCS是否對抗生素刺激敏感，進而篩選出可能與MTB耐藥相關(guān)的TCS。本實驗首先將7H9肉湯培養(yǎng)

3、至對數(shù)生長期的結(jié)核分枝桿菌進行總RNA的提取和鑒定純度；然后進行反轉(zhuǎn)錄，利用SYBR Green定量PCR方法檢測結(jié)核分枝桿菌的雙組份系統(tǒng)的反應調(diào)節(jié)子表達水平。最終篩查出Rv0491、Rv3133c、Rv3143和Rv3246c在耐藥菌株組中的表達與H37Rv相比平均上調(diào)表達2.30、5.85、2.88和3.24倍；敏感菌株組與H37Rv相比平均上調(diào)1.09、1.08、0.68和1.10倍，兩組之間存在明顯差異（p<0.05）。其余基因

4、的表達在耐多藥菌株組、H37Rv和敏感菌株之間沒有明顯差異（p>0.05）。
　　此外，將L-J培養(yǎng)基培養(yǎng)至對數(shù)生長期的結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株，轉(zhuǎn)種至7H9肉湯培養(yǎng)基中；然后分別加入耐藥臨界濃度和1/2MIC的INH、RIF、SM、EMB和LFA，進行誘導培養(yǎng)72h和7d,結(jié)果顯示在抗生素壓力下，Rv1027c、Rv3246c、Rv3143、Rv0491和Rv3133c的表達有明顯變化。
　　雙組份系統(tǒng)反應調(diào)節(jié)子的表達檢測和藥