結(jié)核分枝桿菌耐受表面活性物質(zhì)相關(guān)基因的篩選及功能研究.pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)核分枝桿菌耐受表面活性物質(zhì)相關(guān)基因的篩選及功能研究姓名：廖丹申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：分子生物學(xué)與生物化學(xué)指導(dǎo)教師：謝建平20070501兩南大學(xué)碩十學(xué)位論文中文摘要解結(jié)核分枝桿菌的感染機理以及治療結(jié)核病提供重要線索。同時，結(jié)核分枝桿菌的膜蛋白具有一定的代表性，它不僅有與原核生物中功能保守的膜蛋白，還有某些真核生物類似的膜蛋白，如真核樣的腺苷酸環(huán)化酶，真核樣G蛋白等；所有已知的脂質(zhì)、聚酮代謝途徑在分枝桿菌中都能找到，

2、結(jié)核分枝桿菌中脂質(zhì)、聚酮合成酶中。有很多是超出已知的范圍，研究它們還有可能獲得新的脂質(zhì)聚酮合成途徑。通過序列比對發(fā)現(xiàn)，Rv0621編碼蛋白同其它任何蛋白的序列同源性均不高，所以無法通過信息學(xué)的方法推斷其功能。從其序列的特異性以及其結(jié)構(gòu)的特點推斷，該蛋白有可能成為診斷、治療或者預(yù)防結(jié)核分枝桿菌引發(fā)的疾病的有價值的分子。依據(jù)序列測定結(jié)果，從GenBank登錄的結(jié)核分枝桿菌H37RvRv0621基因序列，設(shè)計引物，從H37Rv的基因組中擴增出

3、基因Rv0621，并將其連入質(zhì)粒pET32a()，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，獲得該基因的融合表達產(chǎn)物。通過親和純化得到重組蛋白純品。用原二色譜以及生物信息學(xué)模型分析該蛋白的二級結(jié)構(gòu)，得到該蛋白的a螺旋、p折疊以及無規(guī)則卷曲的含量分別是1638％，2458％和5904％。通過GCMS對重組菌和空質(zhì)粒對照菌脂肪酸分析，我們發(fā)現(xiàn)，重組大腸桿菌的油酸(C18A9)的相對含量比空質(zhì)粒對照高。文獻顯示，大腸桿菌在20。C時，油酸含量很低。而結(jié)

4、核分枝桿菌中油酸的含量相對大腸桿菌是很高的。重組菌和空質(zhì)粒對照大腸桿菌的這種差異顯示該基因的重組表達產(chǎn)物對重組菌的脂肪酸組成產(chǎn)生一定的影響。因此推測，它在結(jié)核分枝桿菌基因組中的功能可能與該菌的脂肪酸代謝相關(guān)。將重組菌和對照菌上清，純化的重組蛋白處理肺癌細胞A549之后，細胞的形態(tài)有一定的改變，推測重組蛋白與細胞可能有相互作用，對細胞產(chǎn)生影響。從試驗結(jié)果推測，Rv0621編碼的蛋白是一個有意義的分子，在結(jié)核分技桿菌的生理，毒理方面都可能有