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文檔簡介
1、目的:
高遷移率族蛋白(HMGB1)作為炎癥反應(yīng)因子,在敗血癥、關(guān)節(jié)炎等疾病中都發(fā)揮促炎作用。最近研究發(fā)現(xiàn),HMGB1在多種腫瘤中高表達,對腫瘤的生長、遷移、侵襲發(fā)揮重要作用。本研究探討高遷移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血漿中的表達情況及與臨床治療的關(guān)系,通過RNA干擾抑制探討HMGB1對卵巢癌細胞增殖、遷移和侵襲的影響,觀察高遷移率族蛋白(HMGB1)對腫瘤血管生成的體外調(diào)節(jié)作用。
方
2、法:
1.通過ELISA方法分別檢測105例卵巢癌患者治療前及臨床緩解期,46例卵巢良性疾病患者,33例健康女性血漿中HMGB1表達水平,研究高遷移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血清中的表達情況及與臨床治療的關(guān)系。
2.靶向HMGB1基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染卵巢癌細胞SKOV3、A2780,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果。
3.利用real-time RT-PCR和Western blot方
3、法檢測卵巢癌細胞中HNGB1mRNA及蛋白的沉默效果。
4.CCK8法檢測細胞增殖情況,HMGB1沉默后卵巢癌細胞增殖能力的變化。
5.Transwell小室模型檢測HMGB1沉默后卵巢癌細胞遷移和侵襲能力的改變。
6.通過CCK8檢測不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs細胞的體外增殖能力。
7.通過Transwell小室模型實驗檢測不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺
4、激下HUVECs細胞的體外遷移能力。
8.成管實驗檢測不同濃度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs細胞的體外成管能力。
結(jié)果:
1.卵巢癌組HMGB1水平明顯高于良性腫瘤組與健康組(P<0.01),HMGB1水平與卵巢癌疾病分期相關(guān),卵巢癌患者治療后血漿HMGB1明顯下降(P<0.01)。
2.ShRNA沉默HMGB1的表達可以降低卵巢癌細胞的增殖、侵襲、遷移能力。
3.H
5、MGB1可以在體外促進血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移、成管能力,且其促進作用呈劑量依賴關(guān)系。作為陽性對照的VEGF-C有明顯促血管生成的作用。
結(jié)論:
1.卵巢癌患者血漿HMGB1水平較良性患者及健康人高,并隨疾病分期的升高而升高,卵巢癌患者治療緩解后血漿HMGB1下降,可以推測HMGB1與卵巢癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),血漿HMGB1的檢測有希望成為卵巢癌診斷監(jiān)測的新方法。
2.沉默HMGB1基因后可顯著抑制卵巢癌細胞
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