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文檔簡介
1、目的：檢測人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中Nedd4-1和鳥苷酸交換因子CNrasGEF的上下游關(guān)系，研究Nedd4-1調(diào)控U251和U87人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲、遷移作用及其內(nèi)在作用機(jī)制。
方法：(1)采用Polyjet瞬時轉(zhuǎn)染法將shNedd4-1質(zhì)粒和CNrasGEF質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中，應(yīng)用WB法檢測Nedd4-1和CNrasGEF的蛋白水平變化以，并通過劃痕試驗(yàn)和transwell試驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力;(2)采用Pol
2、yjet瞬時轉(zhuǎn)染法將Nedd4-1質(zhì)粒和CNrasGEF質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中，應(yīng)用WB法檢測Nedd4-1和CNrasGEF的蛋白水平變化并通過劃痕試驗(yàn)和transwell試驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力;(3)采用脂質(zhì)體2000法瞬時轉(zhuǎn)染法將CNrasGEF質(zhì)粒或siCNrasGEF轉(zhuǎn)入膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中，應(yīng)用劃痕試驗(yàn)和transwell試驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力;(4)采用Polyjet法瞬時轉(zhuǎn)染法將Nedd4-1或shNedd
3、4-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)入膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中，應(yīng)用劃痕試驗(yàn)和transwell試驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移和侵襲能力
結(jié)果：(1)下調(diào)Nedd4-1同時過表達(dá)CNrasGEF后，兩因素使U251細(xì)胞遷移及侵襲能力增加，兩種因素有相互疊加的作用;(2)過表達(dá)Nedd4-1同時過表達(dá)CNrasGEF組U251細(xì)胞的遷移和侵襲能力改變顯示表明兩種因素有相互抵消作用;(3)過表達(dá)CNrasGEF后，U87細(xì)胞遷移和侵襲能力減弱，下調(diào)CNrasGEF后，U87
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