大麻酚衍生物對(duì)中樞性呼吸活動(dòng)的作用及機(jī)制.pdf

1、大麻素包括天然大麻素、內(nèi)源性大麻素和人工合成的大麻素。△9-四氫大麻酚(△9-tetrahydroeannabinol,△9-THC),是從印度大麻提取出來(lái)的主要的天然大麻素。在動(dòng)物體內(nèi)存在著內(nèi)源性的大麻素系統(tǒng),包括內(nèi)源性大麻素配體、受體和內(nèi)源性大麻素合成及分解的酶。人工合成的大麻素包括非選擇性和選擇性的大麻受體激動(dòng)劑。以往的研究提示大麻素可影響呼吸功能,但這種影響是否涉及呼吸節(jié)律中樞并沒(méi)有直接的證據(jù)。有研究表明:包括呼吸節(jié)律中樞在內(nèi)的

2、延髓腹外側(cè)存在著CB1R和CB2R,提示大麻素可能對(duì)呼吸節(jié)律中樞具有調(diào)節(jié)作用。1984年Suzue等建立了在離體的大鼠延髓研究呼吸中樞活動(dòng)的模型。此后這一模型成為了呼吸中樞研究領(lǐng)域的經(jīng)典方法。因此,本工作首先擬在具有自主呼吸節(jié)律的大鼠延髓腦片,研究大麻受體激動(dòng)劑對(duì)中樞性呼吸活動(dòng)的影響,以及這種影響是否是受體依賴性的。大麻除了通過(guò)其受體起作用,還通過(guò)非受體依賴機(jī)制對(duì)眾多離子通道和受體起調(diào)節(jié)作用。新近的研究表明內(nèi)源性大麻素arachidon

3、oylethanolamide(AEA)可能是ATP-敏感鉀通道(KATP)的抑制劑。因此,本工作還擬在離體延髓腦片模型通過(guò)觀察KATP的藥理學(xué)干預(yù)(選擇性開(kāi)放劑diazoxide,選擇性抑制劑glybenclamide)對(duì)呼吸中樞活動(dòng)的作用,比較大麻受體激動(dòng)劑和glybenclamide對(duì)呼吸中樞的作用是否具有類似性,以及觀察diazoxide對(duì)呼吸中樞的作用是否可被大麻受體激動(dòng)劑以非受體依賴方式所拮抗,驗(yàn)證大麻素在呼吸中樞是否作為K

4、ATP的抑制劑起調(diào)節(jié)作用。
　　 結(jié)果如下:
　　 一.大麻酚衍生物對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的作用及受體依賴性機(jī)制研究
　　 1.為了研究大麻酚衍生物對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的影響,我們首先觀察了非選擇性大麻受體激動(dòng)劑WIN55212-2、選擇性CB1R激動(dòng)劑M1438以及選擇性CB2R激動(dòng)劑AM1241對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的作用。結(jié)果表明WIN55212-2、M1438、AM1241顯著抑制中樞性呼吸活動(dòng)的頻率和面積。這些結(jié)

5、果提示大麻酚衍生物顯著抑制中樞性呼吸活動(dòng)。
　　 2.為了明確大麻酚衍生物是否通過(guò)CB1R起作用,我們研究了CB1R拮抗劑AM251能否拮抗M1438對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的抑制作用。結(jié)果表明M1438對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的抑制作用不被AM251所拮抗。這一結(jié)果提示M1438抑制中樞性呼吸活動(dòng)的作用是CB1R非依賴性的。
　　 3.為了明確大麻酚衍生物是否通過(guò)CB2R起作用,我們研究了CB2R拮抗劑AM630能否拮抗AM124

6、1對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的抑制作用。結(jié)果表明AM1241對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的抑制作用不被AM630所拮抗。這一結(jié)果提示AM1241對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的抑制作用是CB2R非依賴性的。
　　 4.為了研究大麻酚衍生物是否通過(guò)辣椒素受體1(VR1)起作用,我們研究了辣椒素受體拮抗劑釕紅(ruthenium red)能否拮抗CB2R激動(dòng)劑AM1241的作用。結(jié)果表明釕紅不能拮抗AM1241的中樞性呼吸活動(dòng)抑制作用。這一結(jié)果提示大麻酚衍生物對(duì)

7、于中樞性呼吸活動(dòng)的作用亦不依賴于VR1受體。
　　 二.大麻酚衍生物對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)作用的非受體依賴性機(jī)制研究
　　 為了明確大麻酚衍生物是否通過(guò)KATP起作用,我們研究了KATP抑制劑格列苯脲和其開(kāi)放劑diazoxide對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的影響,研究了大麻酚衍生物能否逆轉(zhuǎn)KAxP開(kāi)放劑diazoxide對(duì)于中樞性呼吸活動(dòng)的作用。結(jié)果表明,短時(shí)間(15-20 min)應(yīng)用格列苯脲先興奮后抑制中樞性呼吸活動(dòng),這與短時(shí)間(

8、5-15 min)應(yīng)用大麻酚衍生物所引起的中樞性呼吸活動(dòng)變化的作用模式部分類似;長(zhǎng)時(shí)間(≥1h)應(yīng)用格列苯脲引起中樞性呼吸活動(dòng)抑制甚至呼吸停止,這與大麻酚衍生物在某些腦片對(duì)中樞呼吸活動(dòng)的作用幾乎完全相同。Diazoxide引起中樞性呼吸活動(dòng)嚴(yán)重抑制甚至呼吸停止,格列苯脲、CB1受體激動(dòng)劑M1438、CB2受體激動(dòng)劑AM1241均可逆轉(zhuǎn)diazoxide的呼吸抑制作用,且大麻受體激動(dòng)劑的逆轉(zhuǎn)作用不能被同時(shí)使用相應(yīng)的拮抗劑所拮抗。這些結(jié)果提