重癥胸部創(chuàng)傷大鼠TH1-TH2平衡的變化以及匹多莫德（Pidotimod）對其干預(yù)作用的實驗研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分：小型動物撞擊機的研制及大鼠重癥胸部創(chuàng)傷模型的建立 目的：設(shè)計制作小型動物撞擊裝置，并以此為基礎(chǔ)建立了大鼠重癥胸部創(chuàng)傷模型。 方法：自行設(shè)計制作小型生物撞擊裝置撞擊致傷，該裝置由一根U型截面鋼軌、動物固定臺、驅(qū)動彈簧、撞擊器和測速器組成。撞擊器重量可調(diào)，驅(qū)動彈簧以不同的拉伸長度牽引撞擊器沿鋼軌作直線運動并以不同的速度進行撞擊；動物固定位置可調(diào)，可以實現(xiàn)撞擊點的三維空間定位；動物固定臺近

2、端設(shè)有阻攔裝置，可以通過限制撞擊器撞擊行程控制胸部撞擊時的胸壁壓縮量。在鋼軌上標定出驅(qū)動彈簧不同拉伸長度所對應(yīng)的撞擊器的撞擊速度，反復(fù)測量15次，觀察撞擊速度的誤差以及撞擊中心點的圓周誤差。成年雄性SD大鼠84只，隨機平均分配為7組。均經(jīng)頸部正中切口進行頸動脈插管，經(jīng)耳后皮膚戳孔引出并妥善固定，頸動脈插管連接生命體征監(jiān)護儀對大鼠平均動脈壓、心率進行動態(tài)監(jiān)測。A組為對照組，進行假撞擊；其余各組取右腋前線第3、4肋水平作為撞擊中心點進行水平

3、狀態(tài)準靜態(tài)撞擊。B組設(shè)定撞擊速度3m/s，胸廓壓縮比20‰C組設(shè)定撞擊速度3m/s，胸廓壓縮比40％；D組設(shè)定撞擊速度6m/s，胸廓壓縮比20％；E組設(shè)定撞擊速度6m/s，胸廓壓縮比40％；F組設(shè)定撞擊速度9m/s，胸廓壓縮比20％；G組設(shè)定撞擊速度9m/s，胸廓壓縮比40％。大鼠撞擊前、撞擊后2小時、12小時，分別進行動脈血氣分析。撞擊后12小時處死所有大鼠，開胸判斷傷情并評分后取出肺臟，行常規(guī)病理檢查。 結(jié)果：(1)該撞擊裝

4、置的撞擊速度誤差<4％，撞擊中心點圓周誤差小于3mm。(2)各組大鼠胸部傷情判斷評分發(fā)現(xiàn)：B、C、D、F組創(chuàng)傷較輕；E組創(chuàng)傷較重，4.08±0.90分，死亡率33.3％；G組創(chuàng)傷極重，5.25±0.62分，死亡率83.3％。(3)各組大鼠除早期死亡外，撞擊后一般表現(xiàn)為：動脈血壓傷后即刻下降，后迅速恢復(fù)達到或超過傷前水平；心率傷后即刻下降，后迅速恢復(fù)并超過傷前水平；呼吸暫停，之后出現(xiàn)淺快呼吸。E組大鼠生命體征變化較為典型。(4)E組大鼠動

5、脈血氣分析表現(xiàn)為PH降低、PaO<,2>降低、PaCO<,2>降低(p<0.05)。(5)大鼠肺損傷區(qū)域病理檢查：光鏡下肺組織結(jié)構(gòu)破壞明顯，肺泡內(nèi)的廣泛出血，傷后12小時出現(xiàn)肺泡間質(zhì)水腫，見炎癥細胞的浸潤。 結(jié)論：(1)該動物撞擊裝置撞擊參數(shù)控制準確，重復(fù)性好，且價格低廉，適合廣泛推廣；但是同時也存在自動化程度低，操作較為復(fù)雜等缺陷。(2)以撞擊速度6m/s、胸廓壓縮比40％為撞擊條件，建立的大鼠胸部創(chuàng)傷模型可以模擬臨床所見的重

6、癥胸部創(chuàng)傷患者的典型病理生理過程，穩(wěn)定可靠，可以用于胸部撞擊后胸部重癥創(chuàng)傷、肺挫傷及其繼發(fā)性損傷反應(yīng)的相關(guān)研究。 第二部分：重癥胸部創(chuàng)傷大鼠TH1/TH2平衡的變化以及匹多莫德(Pidotimod)對其干預(yù)作用的實驗研究 目的：研究大鼠重癥胸部創(chuàng)傷后7天內(nèi)外周血單個核細胞(PBMC)體外培養(yǎng)上清液IFN-γ、IL-4水平，籍以反映體內(nèi)TH1、TH2細胞功能的變化。并初步探討了匹多莫德對重癥胸部創(chuàng)傷大鼠IFN-γ、IL-4

7、水平及TH1/TH2平衡的干預(yù)作用。 方法： SD大鼠30只，隨機平均分配到A、B、C組，A組為對照組，B組為創(chuàng)傷實驗組，C組創(chuàng)傷+匹多莫德干預(yù)組。采用本文第一部分所述方法，頸動脈插管后以撞擊速度6m/s、胸廓壓縮比40％條件建立大鼠重癥胸部創(chuàng)傷模型。C組大鼠傷后每日予匹多莫德100mg/kg腹腔注射，A、B組大鼠予等體積生理鹽水。分別于頸動脈插管完成時即刻以及傷后第1、3、5、7天經(jīng)頸動脈插管內(nèi)采取全血各0.8ml，密度梯度離

8、心法分離PBMC，加入PHA，體外培養(yǎng)72小時，收集上清液，凍存待檢。采用ELISA法檢測上清液IFN-γ、IL-4的濃度。 結(jié)果：(1)大鼠生命體征及一般情況變化，符合本文第一部分所描述的胸部重癥創(chuàng)傷后生命體征變化規(guī)律。A組死亡2例，B組死亡4例，C組死亡3例。(2)PBMC培養(yǎng)上清液IFN-γ水平比較：A、B、C三組IFN．Y濃度在傷前差異無顯著性，傷后均迅速升高，于傷后第1天即達到高峰，隨即回落，但傷后7天內(nèi)始終高于傷前水

9、平(p<0.01=；傷后7天內(nèi)的總體水平A組>C組>B組(p<0.01=。(3)PBMC培養(yǎng)上清液IL-4水平比較：A、B、C三組IL-4濃度傷前差異無顯著性，傷后均較傷前升高(p<0.01=，且7天內(nèi)保持上升趨勢；傷后7天內(nèi)的總體水平A組

10、比值，傷后均迅速升高(p<0.01=，于傷后第1天即達到高峰，隨即回落。A組傷后7天內(nèi)始終高于1.0；B傷后第3天恢復(fù)1.0左右，并繼續(xù)降低至0.34；C組傷后第7天低于1.0。傷后7天內(nèi)的總體水平A組>C組>B組(p<0.01)。 結(jié)論：(1)輕度創(chuàng)傷可以刺激大鼠的免疫功能，表現(xiàn)為IFN-γ合成的大幅增加以及IL-4合成的輕度增加，TH1細胞功能加強，出現(xiàn)TH1細胞功能極化。(2)重癥創(chuàng)傷大鼠在傷后早期出現(xiàn)TH1細胞功能極化，

11、TH1細胞功能增強，但是其幅度明顯低于對照組；創(chuàng)傷急性期后(3天后)TH2細胞功能增強，其幅度明顯高于對照組，TH1細胞功能受到抑制，TH1/TH2逆轉(zhuǎn)，發(fā)生TH1向TH2的漂移，出現(xiàn)TH2細胞功能極化。(3)匹多莫德提高了重癥創(chuàng)傷大鼠傷后IFN-γ的合成、釋放功能，而對IL-4沒有明顯的影響，從而延遲了TH1向TH2的漂移，并降低漂移的程度，對重癥創(chuàng)傷大鼠TH1/TH2平衡具有調(diào)節(jié)作用，但是限于本實驗的時間長度，其作用的進一步趨勢尚不