鎂依賴(lài)性磷酸酶Mdp1在胃癌復(fù)發(fā)中的功能研究.pdf

1、胃癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，而胃癌的復(fù)發(fā)是術(shù)后患者治療失敗和死亡的主要原因，因此，研究導(dǎo)致胃癌復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素及調(diào)控機(jī)制，提供診斷和治療胃癌復(fù)發(fā)的新靶點(diǎn)具有非常重要的科學(xué)意義。本文通過(guò)掃描分析胃癌（Ⅲ期）早/晚期復(fù)發(fā)患者臨床組織樣本的DNA甲基化譜，篩選出胃癌復(fù)發(fā)相關(guān)基因之一---鎂依賴(lài)性磷酸酶mdp1，利用甲基化測(cè)序、免疫組織化學(xué)等技術(shù)驗(yàn)證芯片數(shù)據(jù)，并從細(xì)胞水平、分子水平等層次研究Mdp1蛋白的潛在功能，為胃癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移研究提

2、供新的思路和治療靶點(diǎn)。
　　我們通過(guò)Bisulfate Sequencing PCR進(jìn)行甲基化測(cè)序分析，結(jié)果顯示，BGC-823細(xì)胞系DNA甲基化相對(duì)較高，而其Mdp1蛋白表達(dá)相對(duì)較低。隨后我們用DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜胞苷(5aZaC)處理BGC-823細(xì)胞系，Mdp1蛋白表達(dá)水平及熒光報(bào)告基因均有所上升，這提示我們mdp1的DNA甲基化有可能抑制其基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而下調(diào)其蛋白表達(dá)。我們利用免疫組化檢測(cè)胃癌Ⅲ期患者在早期（

3、一年內(nèi)復(fù)發(fā)）和晚期（三年內(nèi)不復(fù)發(fā)）復(fù)發(fā)組織樣本各33例中Mdp1的表達(dá)，結(jié)果顯示大部分的早期復(fù)發(fā)組病例都低表達(dá)，而在晚期復(fù)發(fā)組病例中多高表達(dá)，與芯片數(shù)據(jù)較為吻合，進(jìn)一步表明Mdp1蛋白表達(dá)水平很可能受DNA甲基化的調(diào)控。我們推測(cè)，在早期胃癌復(fù)發(fā)組中，mdp1基因高甲基化低蛋白表達(dá)時(shí)，腫瘤細(xì)胞會(huì)加速生長(zhǎng)從而易導(dǎo)致胃癌復(fù)發(fā)，而晚期胃癌復(fù)發(fā)組中mdp1基因低甲基化高蛋白表達(dá)，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)相對(duì)緩慢。在此推測(cè)的基礎(chǔ)上，我們對(duì)Mdp1蛋白在胃癌復(fù)發(fā)

4、中可能發(fā)揮的功能進(jìn)行了初步的研究。首先，體外磷酸酶檢測(cè)結(jié)果顯示，Mdp1蛋白可能并沒(méi)有文獻(xiàn)所報(bào)道的蛋白酪氨酸磷酸酶活性。同時(shí)，我們選擇胃癌細(xì)胞系BGC-823，建立過(guò)表達(dá)和敲降Mdp1的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。MTT實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明，當(dāng)過(guò)表達(dá)Mdp1時(shí)，能抑制胃癌細(xì)胞增殖并減緩細(xì)胞周期進(jìn)程，相反，當(dāng)Mdp1蛋白表達(dá)降低時(shí)，促進(jìn)細(xì)胞增殖并使細(xì)胞周期進(jìn)程相對(duì)加速，這提示我們Mdp1與癌細(xì)胞增殖有關(guān)，結(jié)合免疫組化等結(jié)果，Mdp1在胃癌復(fù)發(fā)過(guò)程